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1.
三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因的克隆及序列分析   总被引:17,自引:0,他引:17  
以藜科植物山菠菜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因的保守区设计引物,通过RT-PCR技术,从三角叶滨藜cDNA中分离了两个BADH基因片段BADH3和BADH5,并利用巢式PCR、cRACE以及3′-RACE获得全长BADH3。测序结果表明,BADH3和BADH5之间的核苷酸同源性为81%,其推测的氨基酸序列同源性80%。全长BADH3核苷酸序列长1815bp,79~1578bp为一个开放阅读框架,推测的氨基酸序列全长500个氨基酸残基,相对分子质量为54700,pI为5.5。其核苷酸序列和推测的氨基酸序列与山菠菜同源性分别为95%和93%。由三角叶滨藜3′端部分BADH基因的克隆gBADH1和gBADH2推测的外显子序列分别与BADH5和BADH3完全一致,且gBADH1和gBADH2的内含子插入位置和大小有较大差异。表明三角叶滨藜BADH基因是一个多基因家族,至少存在2个成员。  相似文献
2.
农杆菌介导法获得草地早熟禾转Bt基因植株   总被引:10,自引:3,他引:7  
以草地早熟禾品种超级伊克利成熟种子为外植体材料,当愈伤组织诱导培养基中琼脂的用量增加至16g/L时,诱导产生的颗粒状胚性愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织经携带pGBI4AB农杆菌LBA4404的感染和共培养后,在继代培养基上添加50mg/L筛选剂G418,可较好地筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,进而获得具有卡那霉素抗性的再生植株。PCR分子检测结果表明,Bt基因已导入转化植株。生物学抗虫性鉴定结果显示,转Bt基因当代植株对1~2龄棉铃虫具有不同程度的抗性。  相似文献
3.
草地早熟禾转葡萄糖氧化酶基因植株的获得   总被引:10,自引:3,他引:7  
以从大青山草地早熟禾、超级伊克利和午夜等3个草地早熟禾品种的成熟种子诱导产生的颗粒状胚性愈伤组织为受体材料,应用农杆菌介导法将含有葡萄糖氧化酶基因(GO)和新霉素磷酸转移酶基因(NPT II)的重组质粒导入草地早熟禾。愈伤组织经携带pBGO质粒的农杆菌LBA4404的感染和共培养后,转到添加筛选剂G-418 20~50 mg/L的愈伤组织继代培养基上进行筛选,选择对卡那霉素具有抗性的愈伤组织,进而获得再生植株。试管植株的叶片经淀粉-碘化钾显色反应后,检测到转基因植株中产生了过氧化氢。PCR分子检测证明,GO基因已整合到转化植株的基因组中。抗病性鉴定结果显示,转GO基因植株对水稻纹枯病具有不同程度的抗性。  相似文献
4.
悬铃木叶片不定芽再生   总被引:7,自引:0,他引:7  
以普通果球和少果球悬铃木为供试材料,建立了叶片不定芽再生体系。结果表明:种子苗于附加IBA0.01 mg/L、ZT 0.10 mg/L及6BA 0.10 mg/L的WPM基础培养基上扩繁,叶片小而多,叶色深绿;取扩繁苗倒1~5叶片外植体,于附加不同浓度6BA、IBA及KT的WPM培养基上,普通果球和少果球悬铃木最高不定芽再生频率分别达59.5%和100.0%,每个外植体长芽数分别近5个和2个。再生所需最佳激素组合因品种而异,普通果球和少果球悬铃木分别为IBA 0.2 mg/L、6BA 2.0 mg/L及KT 0.5 mg/L和IBA 0.5 mg/L、6BA 2.0 mg/L及KT 0.5 mg/L;不定芽及芽点在WPM 0.01 mg/L IBA 0.10 mg/L ZT 0.10 mg/L 6BA伸长培养基上迅速伸长,且株体健壮;在WPM 0.2 mg/L IBA 0.5%活性炭生根培养基上,根系和上部发育较好。  相似文献
5.
陆地棉CC-NBS-LRR基因的克隆及特征分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
根据抗病基因核苷酸结合位点(Nuc leotide b ind ing site,NBS)设计简并性引物,从陆地棉cDNA中进行RT-PCR扩增。获得含NBS保守域的EST,进一步用RACE技术和TAIL PCR技术获得其中1个EST的全长基因序列,并获得GHNBS基因的5′调控序列。此基因被命名为GHNBS。该基因的编码区长2 583 bp,编码861个氨基酸,GHNBS编码的氨基酸序列与拟南芥R基因具有28%的同源性。GHNBS与拟南芥的其他几个NBS-LRR基因比较发现,它们在保守区外的相似性相当低。Southern杂交和网上数据库搜索分析都表明GHNBS是1个寡拷贝基因。通过半定量RT-PCR分析发现GHNBS在棉花的蕾、花瓣、韧皮部、根及叶中均有表达且在根、叶中表达量比其它部位强,在木质部基本不表达。  相似文献
6.
通过RT PCR技术从盐生植物三角叶滨藜总RNA中,扩增并克隆了BADH68基因。该基因全序列显示,核苷酸序列长1520bp,12~1515bp为1个开放阅读框架,推测的氨基酸序列全长为500个氨基酸残基,其核苷酸序列与菠菜和山菠菜同源性分别为89%和95%。利用BamHI和SacI酶切位点将BADH68基因连接到pCAMBI A2301的多克隆位点,并把35S启动子和nos终止子分别连接到BADH基因的上游和下游的多克隆位点上,获重组植物表达质粒pCAMATBADH682,并转入根癌农杆菌LBA4404中,获LBA4404(pCBAMATBADH682)菌种。  相似文献
7.
转CpTI基因不结球白菜的抗虫性表现   总被引:2,自引:1,他引:1  
通过卡那霉素筛选、目的基因分子检测和生物学抗虫性鉴定 ,从转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因不结球白菜遗传工程植株自交后代中选育出抗虫性可遗传的纯合材料。用室内人工饲喂方法 ,以鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫为靶害虫 ,对转基因植株进行抗虫性鉴定。试验结果显示 ,转CpTI基因纯合材料对 1~ 2龄小菜蛾和斜纹夜蛾幼虫具有抗性 ,但不同株系间和同一株系内植株间的抗虫性程度差异较大  相似文献
8.
AP70抗病基因转化番茄的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
[目的]通过基因工程提高番茄抗病性。[方法]通过冻融法将含萝卜抗真菌蛋白基因的质粒AP70转入农杆菌LBA4404中,再用农杆菌介导法将AP70抗病基因对番茄进行遗传转化,研究预培养、侵染时间等因素对AP70转化番茄的影响。[结果]带柄子叶诱导番茄产生不定芽的效率比子叶块效率高。农杆菌浸染番茄子叶前预培养1 d,不仅能提高子叶存活率,而且可降低共培养时外植体的污染率。农杆菌对番茄子叶的侵染时间最好不超过5 min。外植体筛选培养基中Kam的浓度不宜太高或太低,可获得少量转AP70基因的抗性芽。[结论]农杆菌对番茄子叶侵染前要进行稀释,且侵染时间不宜超过5 min,共培养1 d时转化率较高。  相似文献
9.
夏蜡梅腋芽微繁殖及叶片不定芽再生   总被引:1,自引:0,他引:1  
夏蜡梅(Sinocalycanthus chinensis)是中国特有的一种落叶观赏花木,为国家二级保护珍稀濒危植物.以夏蜡梅当年生枝条的茎段为供试材料,进行腋芽微繁殖和叶片不定芽再生的研究.结果表明:茎段在附加2.00mg/L ZT和0.05 ms/L IBA的WPM培养基上快繁,萌发迅速、芽体粗壮、叶色淡绿,月繁殖系数超过10.0,可以连续继代10次以上;以无菌苗的叶片为外植体在附加2.0 me/L TDZ、0.1 me/L IBA和1.0 me/L KT的WPM培养基上,不定芽再生频率达40%.在3/5MS大量元素+WPM微量元素+WPM有机成分+0.20 mg/L IBA+0.05%活性炭的生根培养基上,试管苗的根系和地上部发育良好,盆钵移栽成活率达100%.该体系的建立为夏蜡梅工厂化育苗以及运用生物技术手段对夏蜡梅进行改良奠定了基础. ms/L IBA的WPM培养基上快繁,萌发迅速、芽体粗壮、叶色淡绿,月繁殖系数超过10.0,可以连续继代10次以上;以无菌苗的叶片为外植体在附加2.0 me/L TDZ、0.1 me/L IBA和1.0 me/L KT的WPM培养基上,不定芽再生频率达40%.在3/ MS大量元素+WPM微量元素+WPM有机成分+0.20 mg/L IBA+0.05%活性炭的生根培养基上,试管苗的根系和地上部发育良好,盆钵移栽成活率达100%.该体系的建立为  相似文献
10.
农杆菌介导葡萄糖氧化酶基因转化油菜   总被引:1,自引:0,他引:1  
以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体材料,采用农杆菌介导法进行葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GO)基因的转化,经卡那霉素抗性筛选获得大量的不定芽.PCR检测结果显示其中22株呈阳性.淀粉-KI染色结果表明在转基因植株中检测到H2O2.在转基因植株×非转基因植株(F1代)中,卡那霉素抗性筛选显示86%的株系呈现典型的孟德尔单基因显性遗传.F1代盛花期茎秆菌核病活体接种结果证实,转基因植株后代菌核病抗性明显提高.证实GO基因已转入油菜植株中并得到有效表达.  相似文献
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