南芥菜花叶病毒衣壳蛋白的克隆、原核表达和多克隆抗体制备

为开发百合中南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)的血清学检测技术及研究ArMV的致病机理,原核表达ArMV衣壳蛋白(coat protein, CP),纯化并制备其多克隆抗体。以侵染东方百合杂交品种‘木门’(‘Conca D’or’)的ArMV基因组为模板,克隆ArMV CP基因全长,构建ArMV CP基因原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)原核表达ArMV CP蛋白,并以纯化ArMV CP蛋白为抗原制备兔抗多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体的特异性。结果表明:克隆获得百合ArMV CP序列(GenBank登录号:MT323117)全长,其长度为1 515 bp,与已知的ArMV CP基因核苷酸序列相似性最高达到93.6%,氨基酸序列相似性最高达到98.2%;SDS-PAGE表明CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为56 ku; Western blot结果显示抗体能够特异性结合ArMV CP蛋白,具有良好的特异性。     

开产期母鸡禽霍乱并发大肠杆菌病的诊治

一、发病情况 我市某养鸡户饲养的2500只蛋鸡,165日龄发病时产蛋率仅为18％,且上升缓慢。发病率为30％,死亡率超过5％。多数是在夜间死亡,早晨喂料时发现,而且是营养良好已开始产蛋的母鸡。 二、剖检变化 死鸡肌肉丰满,胸肌呈熟肉样;腹部稍有膨胀,腹腔内遍布黄色干酪样物;卵巢变性或坏死,卵泡浅黄色或棕褐色,有的呈椰菜花样;腹部脂肪、心冠脂肪、心外膜和胸膜有出血点;肝脏有灰白色针尖状坏死;肾肿大呈紫红色;十二指肠严重出血,有的死鸡子宫内有完整的蛋。     

采用一种新型RNAi载体培育转基因高直链淀粉马铃薯

采用PCR技术分别克隆nos终止子、烟草axi1内含子和烟草ubi.u4启动子,亚克隆部分与马铃薯Sbe1同源、部分与Sbe2同源的融合基因SIII,构建具有“ubi.u4启动子—反向SIII—反向nos终止子—axi1内含子—正向nos终止子”结构的异源3¢端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI,采用农杆菌介导法转化马铃薯品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋,获得了16个转基因植株,其中14个的块茎直链淀粉含量大幅度增加,表观直链淀粉含量介于53.80%~85.33%;但随着直链淀粉含量的升高,转基因马铃薯淀粉含量下降。半定量RT-PCR分析表明,在直链淀粉含量超过80%的转基因株系中检测不到Sbe1和Sbe2基因mRNA的积累。结果表明,异源3¢端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI能够高频、高效地同时抑制马铃薯Sbe1和Sbe2基因的表达,是一个优良的RNAi载体。以载体pCUSNI为基础,再以植物的其他基因为靶,只需在pCUSNI的BamH I和Sac I位点之间插入干涉片段替换SIII即可完成载体构建,而不必构建靶标基因的反向重复序列,使载体制备迅速便捷。     

诱抗剂对切花百合生长、抗病性及相关酶活性的影响

分别用DL-β氨基丁酸(DL-β-aminobutyric acid,BABA)、移栽灵(Isolane,有效成分:10%稻瘟灵,10%噁霉灵)、表油菜素内酯(epibrassino1ide,epi-BR)、水溶性壳聚糖(hydrosoluble chitosan,OS)、苯并噻二唑(acibenzolar,BTH)、脱落酸(abscisic acid,ABA)、MgO和NH4Cl浸泡切花百合种球根部与鳞片,通过盆栽、田间种植和鳞片包埋,测定其生长指标,POD、PAL、PPO等防御酶活性以及根腐病的病情指数。结果表明,各种试剂处理后,植株叶片防御酶活性增加,株高、叶片数、茎粗等生长性状得到改善,子球鳞片数增加,病情指数减小。其中OS400mg·L-1处理的百合在各个生理指标以及抗病性上明显高于对照。     

植物介导的RNA干扰引起马铃薯晚疫病菌基因的沉默

由致病疫霉(Phytophthora infestans)引起的晚疫病是最具毁灭性的马铃薯病害。为明确植物介导的RNAi沉默致病疫霉基因的有效性,本研究采用重叠延伸PCR技术克隆同时与晚疫病菌4个ces基因均同源的融合基因C1234,构建内含子连接的C1234反向重复序列植物表达载体,采用农杆菌介导法转化晚疫病易感马铃薯品种大西洋,经PCR和Southern杂交检测,获得129个转基因株系。离体叶片接种病原菌后,有97个转基因株系发病速度明显慢于野生型,接种6 d后病斑大小和霉层厚度均明显小于对照,并且叶片感病部位没有出现失绿斑,而野生型产生了明显的失绿斑。实时定量RT-PCR分析发现,发病延缓的叶片上致病疫霉4个纤维素合酶基因的表达水平明显低于野生型。本研究表明,转基因植株中产生的以晚疫病菌ces基因为靶标的ds RNA能够沉默致病疫霉相应基因表达,延缓发病进程。     

葡萄品种晚红育苗新技术

葡萄品种晚红采用常规育苗技术很难生根,而嫁接繁殖则其品质又极易受砧木的影响,故目前常采用电热温床催根、营养袋育苗的方法,以满足规模化生产的要求,现将该技术介绍如下.     

葡萄盆栽技术

盆栽葡萄占天不占地,既能美化厅台楼阁,又可为人们提供一定数量的鲜食葡萄,近年来已越来越受到人们的青睐,成为家庭绿化的主要材料之一.但葡萄盆栽以后,由于营养面积受到限制,对肥料、水分、温度的缓冲能力大大降低,植株生长和结果不易达到平衡,故在实际栽培中普遍存在不易结果的问题,因此盆栽葡萄必须采取与大田不同的综合管理技术.现结合多年实践经验,将葡萄的盆栽技术介绍如下.     

黄花菜的栽培及加工技术

黄花菜是百荷科萱草属多年生草本植物，其花蕾营养丰富，味道鲜美。若采摘及时，加工得当，既是桌上美味，又可出口创汇。笔者总结多年实践经验，将其栽培及加工技术介绍如下。     

rd29A启动子克隆及对低温响应的研究

研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35S启动子,构建了具有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pBIG和pBIRG。通过基因枪导入法转化洋葱表皮细胞,在25 ℃和4 ℃条件下培养16 h后,用荧光显微镜观察GFP基因的表达水平。结果表明,在低温条件下,rd29A启动子的活性明显高于CaMV 35S启动子,说明rd29A启动子是一低温诱导型启动子,可满足在低温条件下使目的基因在转基因植物中进行表达的目的。     

葡萄的后期管理

在实际生产中,许多果农往往在采果以后放松对葡萄的管理,导致当年生枝条成熟不良,秋季发根受到抑制,影响来年葡萄的产量及品质.故加强葡萄的后期管理对来年优质稳产至关重要.现笔者结合多年生产经验将葡萄的后期管理技术介绍如下: