人工接种CGMMV的增殖及其对西瓜 光合作用的影响

为明确西瓜感染黄瓜绿斑驳花叶病毒CGMMV后病毒的增殖过程及其对光合作用的影响,本研究以辽宁省田间主栽西瓜品种‘京欣’为试材,测定了人工接种CGMMV后,西瓜植株体内病毒含量、光合色素、光合作用相关指标以及参与光合作用的关键酶活性的变化,结果显示:接种3d后,即可检测到病毒,24d植株内病毒含量达最高;叶绿素a、叶绿素b及类胡萝卜素的含量均有所降低,叶绿素a在9d后均低于健康对照,而叶绿素b和类胡萝卜素在15d后明显低于健康对照,第18天时,健康对照的叶绿素b含量达接种处理的1.33倍;ALA脱水酶活性除第15天与对照无显著差异外,整个测定期间均低于健康对照,21d时健康对照的ALA脱水酶的活性达29.9U/h,为接种处理的2.18倍;PEP羧化酶的活性显著低于健康对照,测定期间接种处理的PEP羧化酶活性变化不大;乙醇酸氧化酶活性明显升高,测定期间其活性均显著高于健康对照;西瓜叶片的光合速率、气孔导度和蒸腾速率均远小于健康对照,而细胞间隙CO_2浓度却比对照高,本研究为揭示西瓜感染CGMMV后的光合作用变化规律奠定了基础。     

杨树烂皮病生防链霉菌的筛选及鉴定

为明确能有效抑制杨树烂皮病菌的拮抗放线菌F58的生防效果及分类地位,采用平板对峙法、杯碟法和人工接种法分别测定了其活菌及发酵液的抑菌活性;并通过形态学、生理生化特征、16S rRNA及全细胞脂肪酸分析等方法研究了其分类地位。结果表明,拮抗放线菌F58对杨树烂皮病菌、杨树溃疡病菌、苹果斑点落叶病菌等13种供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对杨树烂皮病菌和杨树溃疡病菌抑制作用最强,抑菌带达30.2 mm以上,菌株F58发酵液对这2种病菌也有很强的抑制作用,抑菌圈直径分别为56.4 mm和42.7 mm;发酵液的无菌滤液对杨树烂皮病的保护效果和治疗效果分别达88.7%和73.4%。根据菌株形态、生理生化特性、16S rRNA序列比对及全细胞脂肪酸分析,鉴定拮抗放线菌F58为盐屋链霉菌Streptomyces sioyaensis。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒生物学特性及对西瓜生长的影响

对黄瓜绿斑驳花叶病毒(coculnber green mottle mosaic virus,CGMMV)在辽宁省的分布、生物学特性及病毒侵染对西瓜产量和品质的影响进行了研究.结果表明:CGMMV在辽宁省的营口、鞍山、沈阳、丹东、大连、辽阳等地均有分布;在供试的5科21种植物中,病毒仅可侵染葫芦科的西瓜、黄瓜、葫芦、南瓜、角瓜、甜瓜、瓠瓜7种植物,并表现系统花叶症状.该病毒致死温度95～100℃,稀释限点104～10-5,体外保毒期119d.电镜观察病毒粒子直棒状,长300nm,宽15nm.RT-PCR检测表明,盖州、台安、新民的西瓜花叶样品为黄瓜绿斑驳花叶病毒两瓜株系.利用春秋两季大棚栽培西瓜接种试验表明,西瓜感染CGMMV后,导致植株生长缓慢,结瓜稍小,自根西瓜产量减产幅度很大,秋季大棚减产38.7%～47.6%,春季大棚减产11.4%～19.4%;采用葫芦嫁接的两瓜产量损失变化较小,秋季大棚减产3.4%～17.5%,春季大棚减产2.5%～9.1%.另外,研究结果表明,CGMMV侵染直接导致西瓜倒瓤,使西瓜丧失食用价值,血清学检测倒瓤西瓜携带CGMMV.     

铁元素诱导烟草抗PVY^N的调控作用研究

采用病情指数调查、DAS-ELISA和生理生化指标测定的方法,研究了铁元素对烟草抗马铃薯 Y 病毒脉坏死株系(PVYN)的室内效果及对植株抗病性的诱导作用.结果表明:当烟草叶面喷施铁元素浓度为33.60 mg·L-1时.烟株显症时间要迟于对照,使病毒含量降低至7.31mg.mL-1.仅为对照的45%.单独喷施铁元素和喷施铁元素后再接种PVYN处理,均能提高烟株体内过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)活性,并且在短时间内使活性氧的生成速率提高1.6倍,叶绿素a的含量提高1.4倍,表明铁元素能诱导烟株防御反应的应答,但对苯丙氨酸解氨酶(PAL)影响不大.此外,铁元素处理后再接种PVYN的烟株体内PPO活性一直呈缓慢上升趋势.在12d内略高于接种对照烟株,而12d后为显症时期,接种对照烟株体内的PPO活性迅速上升为6463.54U·mg-1pro·h-1,是铁元素处理后接种烟株的1.5倍,表明PPO与叶脉褐变密切相关,而铁元素处理可以抑制PPO活性的快速提高,从而减轻褐变症状.因此,喷施铁元素后可以诱导烟草植株产生抗病性,增强烟草对PVYN侵染的抵抗力.     

DES诱变杨树溃疡病生防链霉菌及其发酵条件优化

为提高杨树溃疡病生防链霉菌的抑菌效果,采用不同浓度的DES(硫酸二乙酯)对生防链霉菌F-57进行诱变处理,以杨树溃疡病菌为指示菌,发酵后进行生物活性测定,确定DES诱变最佳浓度为2%,最终从200株突变株中筛选到1株遗传稳定抗菌效果较好的突变株,编号F-57-06。对摇瓶培养F-57-06产生抑菌活性物质的发酵条件进行优化,单因素试验结果表明玉米粉为碳源,KNO3为氮源,初始pH为7,250mL三角瓶装液量30mL,接种量3%,培养时间132h;通过正交试验确定最佳营养成分配比为:玉米粉4%,KNO30.5%,CaCO30.2%,NaC1 0.35%,MgSO4·7H2O 0.15%。经DES诱变及培养基优化后,杨树溃疡病生防链霉菌F-57抑菌活性有很大提高,其抑菌圈直径达原始菌株的1.35倍。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒对西瓜产量、品质及种子带毒的影响

研究了西瓜不同时期接种黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)后对其生长、产量、品质和种子带毒的影响。西瓜植株接种CGMMV越早其生长受到抑制越明显,砧木期、嫁接后定植前、定植期、压蔓期、授粉期各处理的株高、叶片数、叶片长与对照相比差异极显著(p0.01),而结瓜以后接种CGMMV对西瓜生长状况无显著影响。压蔓期前3个生育期接种该病毒,西瓜产量损失分别为56.49%、55.48%和51.14%。而压蔓期以后接种该病毒,西瓜产量损失与对照相比仍分别降低17%、13.1%和14.35%。关于倒瓤情况,压蔓期前接种该病毒可导致西瓜果实100%倒瓤,压蔓期、授粉期接种处理西瓜倒瓤率分别为48%和34%,即使结瓜后再接种病毒西瓜倒瓤率仍高达18%。血清学检测表明,压蔓期前接种的西瓜其果肉和种子均携带CGM-MV,带毒率达100%;结瓜后再接种CGMMV西瓜种胚和果肉的带毒率仍然高达64%。检测种胚和果肉病毒含量表明,接种时期越早病毒含量越高,但结瓜后接种仍有较高的病毒含量,种胚和果肉的病毒含量分别达5.98 mg/mL和5.64 mg/mL。     

人工接种CGMMV后与西瓜倒瓤相关部分生理指标的研究

 本研究以辽宁省田间主栽西瓜品种“京欣”为试材,通过测定多聚半乳糖醛酸酶(PG)的活性,以及乙烯、丙酮酸及丙酮酸代谢产物—乳酸、乙醛、乙醇含量的变化,明确了西瓜感染黄瓜绿斑驳花叶病毒后上述生理指标的改变与西瓜倒瓤的关系。研究结果表明:接种处理的西瓜果实授粉后7 d和28 d PG出现2次活性高峰,PG活性过高将导致果肉软化;乙烯含量亦在授粉后21~28 d明显高于健康对照,这一变化将导致果肉水渍化败坏;无论接种早晚,西瓜果实内丙酮酸及丙酮酸代谢产物均有不同程度的积累。定植期接种处理的西瓜,授粉后21 d时西瓜果实内丙酮酸含量为健康对照的2.51倍,35 d时达健康对照4.09倍;授粉后7 d乳酸含量已显著高于对照,35 d时接种处理的西瓜果实内的乳酸含量迅速增加至43.5 μmol·g^-1FW,达健康对照的4.7倍;乙醛含量随着西瓜成熟逐渐增加,尤其是授粉后21~35 d乙醛含量增加速度极为迅速,35 d时达健康对照的26.4倍;乙醇含量授粉后7 d最高,达健康对照的10.1倍,随后有所下降。于压蔓期接种处理的西瓜果实,授粉后21 d,丙酮酸、乳酸、乙醛含量明显高于健康对照,但均低于定植期接种处理的,乙醇含量与健康对照无明显差异,也就是说,感染该病毒越早,对西瓜的生长影响越明显。     

硼对西瓜蔗糖代谢的影响及对黄瓜绿斑驳花叶病毒的抗性诱导

以辽宁田间主栽西瓜品种"京欣"为试材,通过室内盆栽试验及田问大棚试验,采用病情指数调查、酶联免疫吸附一双抗夹心法、田间倒瓤率调查和蔗糖合成相关生理指标测定,研究了硼元素抗黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber Green Mottle Mosaic Virus,CGMMV)的室内效果、田间对西瓜倒瓤率的控制作用及其对西瓜蔗糖代谢的诱导作用.结果表明:叶面喷施硼元素浓度为30 mg/L时,萌芦的发病程度及病毒含量均显著低于接种对照(P<0.05);单独喷施硼元素和喷施硼元素后再接种CGMMV处理,均可通过调节与蔗糖代谢密切相关的酸性转化酶(A1),中性转化酶(NI),蔗糖合成酶(SS),蔗糖磷酸化酶(SPS)活性,促进蔗糖的合成.此外,田间试验结果表明:西瓜感染CGMMV前,喷施硼元素,可降低西瓜倒瓤率,对西瓜倒瓢的防控作用可达42.9%,且果肉内病毒含量低于接种对照.因此,喷施硼元素后可以通过调控蔗糖代谢相关酶活性,促进蔗糖的合成,从而抑制西瓜倒瓤.     

一株蓝莓溃疡病拮抗菌发酵条件优化及稳定性研究

为了明确最有利于蓝莓溃疡病生防链霉菌CX3发酵的营养条件和发酵条件,采用碳氮源筛选法确定发酵培养基的最佳碳源、有机氮源和无机氮源,通过正交设计试验确定碳、氮源的最佳配比,同时,采用单因素法对优化后的CX3发酵液的稳定性进行测定.优化后的发酵培养基配方为:葡萄糖60 g,花生饼粉40 g,硝酸钾4 g,氯化钠4 g,碳酸钙4 g,水1000 mL,pH 7.0.最佳发酵条件为:发酵温度28℃,摇床转速150 r·min-1,初始pH为7、发酵时间6 d、菌株种龄6 d、种子液与培养基体积比5％.优化前的抑菌直径是15.93 mm,优化后是24.88 mm,优化后的抑菌圈直径增加8.95 mm.发酵液稳定性测定结果表明:发酵液耐碱但对pH小于4的酸性环境敏感;对温度耐受性好,121℃时发酵液失活,易贮存,常温保存15 d,发酵液亦可保持较好的抑菌活性.本研究筛选获得的拮抗菌株CX3的发酵培养基条件经优化后,发酵液抑菌能力显著提高,且发酵液的理化性质稳定,开发前景广阔,为蓝莓溃疡病的生物防治提供了新的生防因子.