基于病毒宏基因组技术侦测牡蛎体内病毒

建立了牡蛎(Crassostrea spp.)病毒宏基因组研究方法,应用差速离心和蔗糖垫超速离心提取病毒样颗粒,核酸酶处理宿主游离核酸后提取病毒总核酸,经反转录、双链合成和核酸扩增获得足量DNA。高通量测序共获得1 661 809 000个碱基,包括6 647 236个读长(reads)信息,拼接后得到50 842个重叠群(contig),序列总长度达到14 239 389 bp。同时从reads质控图等多方面对测序数据进行分析与评估,显示测序数据质量良好。数据与病毒库进行比对,发现病毒序列来自于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)和疱疹病毒科(Herpesviridae)2个科,类单纯疱疹病毒(Simplexvirus)、心病毒(Cardiovirus)和肠道病毒(Enterovirus)3个病毒属。     

哈维氏弧菌感染的杂色鲍全组织均一化cDNA文库的构建

提取了哈维氏弧菌（Vibrio harveryi）感染的杂色鲍（Haliotis diversicolorReeve）总RNA,采用SMART方法合成双链cDNA,并用双链特异核酸酶进行均一化处理。割取0.5~1.0和1.0~3.0kb的片段分别连接pDNR-LIB并转化大肠杆菌（Esherichia coli）,最终构建2种片段大小的杂色鲍全组织均一化cDNA文库。2文库库容均在2.5×105cfu.mL-1左右,PCR检测阳性重组率为100%。随机挑取200个克隆测序,获得高质量EST序列174条。组装后得到149条Unigenes,冗余率为14.37%。序列注释结果表明,有39条Unigene序列与已知基因高度相似。综上所述,文章所建cDNA文库质量良好,可以满足后续研究工作的需要。     

海南新村港养殖合浦珠母贝主要多毛类寄生虫的流行病学调查

对海南新村港珍珠贝养殖基地的1～1.5龄和2龄以上的合浦珠母贝上的寄生多毛类的种类和数量做周年采样调查,并分析优势种的数量变化规律,结果表明,合浦珠母贝上的寄生多毛类主要有9种,其中缨鳃类、丝鳃类、才女虫类3种为优势种;贝龄越大,丝鳃类、才女虫类寄生虫总数量越多,而缨鳃类数量并无明显变化;2龄以上合浦珠母贝的3种主要多毛类寄生虫的总数量在10月份达到最高峰,而在1月份最低,其中缨鳃类数量的周年变化不显著,才女虫类的数量在4月份时达到峰值,而在10月份最低,丝鳃类的数量在10月份达到峰值,而在4月份最低。     

才女虫属复合体的研究进展

才女虫属复合体（Polydora Complex）是典型的底质摄食者,多数种类栖居于潮间带、海湾、河口等近岸水域。其中一些种类是贝类上常见的多毛类寄生虫,能够钻入贝类的壳内营寄生生活,阻碍宿主的生长发育,感染严重时会导致贝类的大量死亡,是严重危害贝类养殖业发展的主要寄生虫类之一。文章从才女虫属复合体的形态分类、分子系统发育、栖居习性、生殖方式、幼体发育等5个方面综述才女虫属复合体的研究现状以及未来趋势。     

方斑东风螺“急性死亡症”的病原病理研究

对海南发生的方斑东风螺（Babylonia areolata）“急性死亡症”进行了病原分离纯化、人工感染试验,以及病原16SrDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌（Vibrioharveyi）;药敏试验结果显示,该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感,而对青霉素表现为耐药;组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。     

血蓝蛋白在杂色鲍各组织中的分布研究

利用Western blotting方法对血蓝蛋白（hemocyanin）抗体浓度进行优化,进而运用免疫组化方法对杂色鲍（Haliotis diversicolor）血蓝蛋白在肝胰脏、外套膜、鳃、消化道、腹足中的分布规律进行了研究。免疫组织学检测发现血蓝蛋白在杂色鲍各组织中均有分布,其中肝胰脏、外套膜和鳃中分布较多,消化道和腹足中相对较少。     

理化因子对杂色鲍血蓝蛋白酚氧化酶活性影响的研究

以邻苯二酚为底物研究部分理化因子对杂色鲍（Haliotis diversicolor）血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。结果表明，血蓝蛋白酚氧化酶活性最适温度34℃、最适pH6．4；铜离子（Cu^2＋）能极其显著增强血蓝蛋白的酚氧化酶活性，增强率为264％，而乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、镁离子（Mg^2＋）和锌离子（Zn^2＋）则能极其显著地抑制其活性，EDTA的抑制效率最高，抑制率为52．8％，Mg^2＋和Zn^2＋的抑制率分别为27．8％和25％。钙离子（Ca^2＋）对血蓝蛋白酚氧化酶活性影响不显著。     

盐度渐变对杂交鲍免疫因子的影响

采用逐渐改变盐度的方法,结合相关免疫酶学测定方法,研究盐度由34渐变至16、22、28、40后,48 h内杂交鲍[皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino,♀)×日本盘鲍(H.discus discus Ino,♂)]血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、抗菌活力(Ua)的变化规律,旨在研究盐度渐变对杂交鲍免疫相关因子的影响.结果显示,盐度28、34(对照)组5种免疫因子变化均不显著.盐度40组,AKP活力极显著低于对照组;CAT活力显著升高,而后逐渐降低,最终显著低于对照组;LZM活力下降后逐渐稳定在一个显著低于对照组的值.盐度22组,AKP活力有下降的趋势,在48 h时显著低于对照组.盐度16组SOD、AKP、LZM、Ua均有下降的趋势,并且在48 h时均显著低于对照组;整个试验过程中,CAT活力均显著低于对照组.结果表明,盐度接近或高于40及接近或低于16将显著影响杂交鲍5种免疫因子的活力,进而影响其免疫力.     

杂色鲍低温病毒病研究进展

杂色鲍是一种重要的养殖鲍品种,主要分布于中国南部沿海.但是近年来,鲍的病害频发,尤其是1999年以来暴发的鲍低温病毒病严重影响了鲍养殖产业的健康发展.首先对鲍低温病毒病的发现及其相关病原的鉴定进行综述,重点讨论了其主要病原——鲍肌肉萎缩症病毒(AbSV)的基因组及其与血蓝蛋白的关系,并介绍了最新建立起来的两种AbSV的快速检测方法.对10多年来鲍低温病毒病的研究进行系统总结,并提出具有重要研究价值的科学问题,为日后病毒形态及其与血蓝蛋白关系等方面的深入研究提供参考.     

盐度胁迫对近江牡蛎几种免疫因子的影响

试验分析了盐度从18骤变至3、25、40的第24 小时和第48 小时江牡蛎（Crassostrea hongkongensis）血淋巴超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、过氧化氢酶（CAT）和溶菌酶（LSZ）的活力变化,旨在研究盐度骤变对相关免疫因子的影响。结果显示,对照组（盐度18）4项免疫因子变化不显著（P＞0.05）。盐度25组AKP、LSZ活力在第24 小时极显著高于对照组（P〈0.01）。盐度3组SOD活力在第24 小时显著高于对照组（P〈0.01）,其他酶活力与对照组相比差异不显著。盐度40组SOD活力在第24 小时显著低于对照组（P〈0.01）,而LSZ活力在第48 小时急剧下降,极显著低于对照组（P〈0.01）,其他酶活力与对照组相比差异不显著。由此可见,盐度骤变对近江牡蛎的免疫活力有明显的刺激作用,且可能在一定范围内能够增强机体免疫力。近江牡蛎对低盐有很强的适应能力,但在高盐胁迫下其免疫活力下降。