硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染表达检测

为建立硫化物醌氧化还原酶(SQR)的肠道定向表达载体,同时通过转染小鼠肠道上皮细胞确定载体的有效性,本试验采用重叠PCR、中间载体法、酶切连接法获得重组载体,通过脂质体转染法将重组载体转入小鼠肠道上皮细胞,并鉴定重组载体的特异性表达。结果显示,成功构建了以肠脂肪酸结合蛋白质(IFABP)为启动子的SQR肠道定向表达载体pc DNA3.1(-)-IFABP-SQR-GFP,并在小鼠肠道上皮细胞中检测到表达的融合绿色荧光蛋白质(GFP)。表明IFABP启动子能够在肠道细胞中定向启动SQR的表达。     

猪受精卵第二极体的采集与保存

哺乳动物卵巢中的初级卵母细胞成熟后排出第一极体,卵母细胞随即进入第二次减数分裂过程,并休止于分裂中期(M Ⅱ期),此时期卵母细胞若与精子结合受精,则受精后的卵母细胞被激活突破M Ⅱ 期阻滞,通过后期末期完成第二次减数分裂,排出第二极体(PB Ⅱ)[1-2] .     

SQR基因在大肠杆菌和乳酸菌中的表达

为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过KCM法转化到大肠杆菌DH5a中,提取所得到阳性大肠杆菌菌株质粒pMG36e-SQR-Myc进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸菌MG1363中,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测SQR蛋白质在其中的表达情况。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pMG36e-SQR-Myc被成功构建,目的蛋白质SQR在大肠杆菌和乳酸菌MG1363中被成功检测到。因此,乳酸菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。     

脂质体转染对小鼠肠上皮细胞的影响

小鼠肠上皮细胞(IEC)是一种快速更新的细胞,脂质体转染法是哺乳动物细胞转基因常用的转染方法.以IEC为研究对象,从转染前后细胞形态、细胞周期及染色体倍性等方面的变化研究脂质体转染对IEC的影响.结果显示,脂质体转染后形态不正常的细胞增多;细胞周期中G0/G1期细胞比例显著增加(P＜0.05),以3代的细胞转染为例,由对照的62.4％增加到73.4％;S期同转染前相比显著降低(P＜0.05),由20.4％降低至13.2％;然而从染色体倍性看,统计分析表明转染前后没有显著差异.从以上几个方面可以看出,脂质体转染对IEC产生了一定的负面影响.