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马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H_2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。 相似文献
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桉树是以异花授粉为主的树种。许多不同树种之间具有很强的杂交亲和力。随着桉树树种和种源的不断引进,为自然杂交和人工控制杂交提供了更多的机会和广泛的基因基础。一、天然杂交我国已发现和利用的天然杂交桉树种有:蓝大桉,雷林一号桉,柳窿桉等。最近在东门发现了尾叶桉(E.urophylla)×窿缘桉(E.exserta),巨桉(E.grandis)×窿缘桉,巨桉×褐桉 相似文献
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造林"双保"工程,就是造林"保水"工程和造林"保护"工程的综合。其要点就是在造林施工中,保护树苗不要失水干枯,整地植苗,为幼树创造一个良好的水环境在内的生存环境;造林后认真保护,使新造幼林安全生长成林,从而提高造林成效,加快"绿色山西"建设步伐。 相似文献
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微生物在污染环境生物修复中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
生物修复是一项利用生物特别是微生物治理污染的技术。与理化修复方法相比具有投资少、对环境影响小的优点。本文重点分析了影响微生物修复的关键因素,包括生物因素、营养因素、O2和电子受体、表面活性剂和共代谢物等,并介绍了微生物在生物修复中成功应用的实例,讨论了生物修复所具有的优势和存在的不足及今后研究重点。 相似文献