RNA沉默—新型的植物病毒病害防治策略

植物RNA沉默(RNAsilencing)是植物本身固有的一种抗病毒防御系统,是对病毒在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的特殊反应。RNA沉默介导的dsRNA干涉病毒侵染转基因抗病毒有其不足,几种体外生产dsRNA的抗病毒体系能弥补这一不足,它们与转基因表达病原RNA不同,但仍然依赖RNA沉默机制来获取病原抗性。综述了近年来发展起来的各种启动RNA沉默的dsRNA产生策略、抗病状况和存在的问题及发展前景     

山西省北杜坞村半夏与冬小麦间套作栽培技术研究

本试验根据山西省北杜坞村的气候条件以及半夏和冬小麦的生物学特性,进行了半夏与冬小麦间套作栽培试验,结果表明半夏的适宜播种期为3月15日~3月25日,新种半夏地的适宜播种量为130kg/667m2,重茬半夏地其播种量应比上一年的减少30%,适宜播种深度为5cm~7cm,此外,采用农家肥料、小麦秸秆双覆盖和小麦收割时留高茬,外加小水勤灌,每次灌溉量17.5m3/667m2等措施均有利于提高半夏的产量。     

泡桐花抑菌活性成分最佳提取工艺研究

随着社会经济的发展和人民生活水平的提高,食品防腐剂的安全日益受到人们的关注。而化学防腐剂的致癌性和致畸性等问题的存在,使得开发高效、安全、稳定的天然食品防腐剂迫在眉睫。以黑曲霉、桔青霉、黑根霉、米曲霉、绿色木霉、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌为供试菌种,采用菌丝生长速率法和滤纸片扩散法,通过单因素试验,研究不同提取方法、干燥方法和提取剂对泡桐花抑菌活性成分提取的影响,确定了泡桐花抑菌活性成分的最佳提取工艺为:阴干的泡桐花以无水乙醇为提取剂,采用超声辅助提取。     

地被菊品种对镰孢菌侵染的响应差异及抗性综合评定

 地被菊枯萎病由镰孢菌引起,是一种土传性病害,严重威胁地被菊生产。本试验用2个强致病力镰孢菌菌株,即尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、茄镰孢菌(F. solani)接种5个地被菊品种的幼苗,测定了病菌侵染下不同品种的形态、生理和生化响应的差异,以建立抗病品种筛选的生理和生化指标。地被菊品种间抗性水平可根据病情指数划分;受病菌侵染后,叶片叶绿素含量下降,抗病品种‘俏粉阁'叶绿素含量相对较高;丙二醛含量增加,抗病品种‘乳荷'和‘俏粉阁'的丙二醛含量显著低于感病品种‘玲珑';在病菌侵染早期,脯氨酸含量、超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性在抗病品种受到迅速诱导增加,随后下降。运用隶属函数对其抗病能力进行综合评定,地被菊品种对尖孢镰孢菌(F. oxysporum)抗病性从强到弱依次为:‘俏粉阁'＞‘乳荷'＞‘火焰'＞‘鲜红'＞‘玲珑',地被菊品种对茄镰孢菌(F. solani)抗病性从强到弱依次为:‘俏粉阁'＞‘乳荷'＞‘鲜红'＞‘火焰'＞‘玲珑',为地被菊生产和开展菊花抗病机理研究提供了依据。     

淫羊藿中药添加剂对贵妃鸡产蛋性能和蛋品质的影响

为了研究日粮中添加含有淫羊藿等味中药的降脂增蛋散复方添加剂对贵妃鸡产蛋性能、蛋品质及蛋黄胆固醇的影响,选用28周龄贵妃鸡96只,每组32只,分为对照组、低剂量添加剂组、高剂量添加剂组(对照组喂基础日粮,低剂量组喂基础日粮添加1.12 g/kg的复方中药添加剂,高剂量组喂基础日粮添加11.2 g/kg的复方中药添加剂)。结果表明,试验组鸡的产蛋性能和蛋品质均有所增加,且随添加剂量的增加效果更加明显;高剂量组的蛋黄胆固醇含量有显著性降低。使用含有党参、淫羊藿等药材的复方中药添加剂可以提高贵妃鸡的产蛋性能和蛋品质。     

黄瓜花叶病毒(CMV)2个山西分离物CP序列测定及亚组分类分析

 在生物学检测的基础上,利用酶联免疫检测、非序列依赖性PCR(sequence-independent amp-lification, SIA)对感病番茄进行分子鉴定,表现卷叶和花叶症状的番茄均被黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)侵染,分离物分别命名为SXFQ(GenBank登录号为JX993914)和FQ(GenBank登录号为JX993912)。为明确其分类地位,对二者外壳蛋白(coat protein, CP)进行克隆和测序分析。应用DNAMAN软件对本课题组前期检测的7个CMV山西分离物、SXFQ、FQ以及其他3个CMV典型分离物CP序列进行比较分析,发现核苷酸和氨基酸序列最大相似性分别为77.1%~100%和81.6%~100%。氨基酸序列系统进化分析表明,9个CMV山西分离物属于CMV亚组I B的2个分支,其中在指示植物上表现较强症状的SXFQ与其他5个分离物为一分支,在指示植物上表现较弱症状的FQ与其他2个分离物为另一分支。对9个山西分离物CP进行亚组分类分析,结果表明其理化性质、稳定性、疏水性与预测结果相近,2个分支的分离物分别出现相近的氨基酸变异和蛋白结构,存在一定规律性。     

侵染芹菜的甜椒内源RNA病毒鉴定及序列分析

本试验利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)提取技术和非序列依赖PCR扩增(sequence-independent amplification,SIA)方法对表现皱缩症状的芹菜进行分子鉴定,发现芹菜被甜椒内源RNA病毒Bell pepper alphaendornavirus(BPEV)所侵染。为进一步明确山西芹菜BPEV分离物(BPEV-QC,GenBank登录号为KY659226)的分类地位,根据SIA测序结果设计BPEV特异性引物进行RT-PCR检测,并进行序列相似性比较和系统进化分析。序列同源性分析表明:BPEV-QC与BPEV分离物(IS、Maor、Kyosuzu、BPEV、lj、BPEV-YW)的同源性为80.0%~97.8%,与其他内源RNA病毒科分离物的同源性仅为30.6%~37.6%,表明:BPEV-QC与BPEV分离物(IS、Maor、Kyosuzu、BPEV、lj)形成一个独立分支,亲缘关系最近。     

臭椿病毒病病原鉴定

臭椿(Ailanthus altissima)属苦木科(Sima-roubaceae)落叶乔木,为我国常用中草药;以根皮入药,具有消炎、杀菌、杀虫、抗肿瘤及抗病毒等作用;亦可用在建筑、能源、环保和造纸等方面,具有广阔的开发和应用前景。已有研究表明,引起臭椿花叶症状的病毒病原主要     

应用RNA沉默技术获取抗黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草

RNA沉默是迄今最为有效的抗病毒策略,利用该策略不但能获得免疫转基因植株,且所得植株不易与其他病毒基因重组或异源包壳、生物安全性较高。将本实验室已构建的携带有烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(ΔMP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因(ΔRep)反向重复结构的植物表达载体pBIN438-MP-Rep(i/r),用农杆菌浸润法转化普通烟草品种K326,共得196株转化植株,经卡那霉素筛选和PCR检测发现128株为阳性转基因株;PCR-Southern和RT-PCR分析表明外源基因已整合到烟草基因组并在转录水平上得到表达;ELISA结果显示20.3%的转基因植株对CMV和TMV复合侵染表现免疫性。本结果为利用RNA沉默技术进行植物抗多种病毒育种提供重要数据,为防治其他多种病毒复合侵染提供借鉴。     

高效诱导植物RNA沉默的反向重复构件的设计

RNA沉默(RNA silencing)是真核生物体内普遍保守的、发生在RNA水平的、基于核酸序列同源性相互作用的一种对基因表达的调控机制.通过设计反向重复构建在植物体内产生双链RNA来诱导RNA沉默的方法是一条非常有效的植物抗病毒和功能基因组研究途径.本研究通过两个病毒基因的反向重复构建发展了两种通过小型中间载体设计反向重复构建的方法.其共同特点是构建简易,操作方便,可为通过设计反向重复构建实现植物体内高效持久的RNA沉默提供方法上的参考,促进RNA沉默技术更加广泛深入地应用于植物抗病毒基因工程研究和植物功能基因组研究.