猪繁殖与呼吸综合征病毒和致病性沙门氏菌的混合感染

2003年9～11月某猪场发生母猪持续性繁殖障碍和7日龄仔猪呼吸困难、寒颤、下痢、体温升高和实质性器官出血为主要特征的疾病。3头发病仔猪的病变组织用RT-PCR检测。均为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性；由3头发病猪病料中所分离的细菌。可于普通琼脂、伊红美蓝和麦康凯琼脂培养基上生长，革兰氏染色阴性，形态与组织触片镜检及生化反应特性与沙门氏菌一致，可致死小鼠。仅对头孢唑啉呈中度敏感。结合该病的流行病学调查、临床症状、病理剖检，确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和致病性沙门氏菌混合感染。     

不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究

用3对分别针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果显示:3对引物对PRRSV均有很高的特异性;应用N1/N2引物病毒最低检测量为7.9 TC ID50,而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79 TC ID50;运用N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物分别进行RT-PCR扩增检测临床样品,PRRSV检出率分别为28/48、27/48和25/48,且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374 bp的目的基因片段。结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和临床样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。     

RNAi分子机制和研究方法进展

RNAi,即RNA干扰,是生物体感受双链RNA后诱导同源靶基因沉默的现象.RNAi现象最早是在对线虫的研究中发现长双链RNA(dsRNA)导致线虫同源mRNA降解,后来发现,dsRNA相比正义、反义单链RNA具有更强的基因沉默效应[1].     

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建与鉴定

猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白（Rep）和核衣壳蛋白（Cap）,其中Cap含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。本研究利用PCR技术将Cap蛋白基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体（pShuttle-CMV）,与腺病毒骨架载体（pAdEasyTM）共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒tAd-Cap,测定其TCID50为1015．7／mL。用RT—PCR、间接ELISA、Westernbfot和IPMA等方法证明了Cap蛋白在腺病毒中获得表达。该研究为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。     

巨星猪病防控工程技术中心建成运行

为保障生猪养殖事业的健康稳定发展，实现猪群疾病的可预知、可预测、可预防，四川巨星集团生猪事业部于2008年10月开始筹建巨星猪病防控工程技术中心。通过与崇州市农发局的密切合作，经3个月的努力，中心于2009年2月初正式投入使用。     

副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察

用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。     

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

在通过对上海一发病猪群临床流行病学研究和病理学观察的基础上 ,从发病仔猪肺脏、气管和脾脏检出并分离到 1株革兰氏阴性细小杆菌 ,兼性厌氧。生化试验为 :接触酶阳性 ,氧化酶阴性 ,鸟氨酸脱羧酶、吲哚和脲酶阴性 ;生长需要NAD ,发酵果糖、半乳糖、葡萄糖和蔗糖 ;不分解D 甘露醇、D 山梨醇和海藻糖。用副猪嗜血杆菌的 1 6S小亚单位rRNA和tbpA基因的特异性PCR引物 ,通过PCR技术分别从该分离菌株扩增出 82 2bp及 1 9kb的特异基因片段 ,表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌     

副猪嗜血杆菌病的病理学研究

用三个副猪嗜血杆菌分离株分别感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难,剖解可见胸腹腔纤维素渗出严重、有大量的渗出液、肺出血及脑充血等,病理组织学表现为含有大量的嗜中性细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎,表明该分离株为一高致病潜力的菌株。     

TJM-F92株弱毒疫苗在蓝耳病感染猪场的应用

猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的传染病.妊娠母猪和未断奶仔猪最易感,发病猪容易继发猪副嗜血杆菌病、猪链球菌病、猪放线杆菌病和猪喘气病等,死亡率高.据报道,2005年蓝耳病给美国养猪业造成的经济损失达56 000万美元,201 3年经济损失达66 400万美元.2006年,我国不断暴发PRRSV变异株引起的高致病性猪蓝耳病疫情,仔猪发病率高达100％,死亡率50％以上,母猪流产率30％以上,育肥猪也发病死亡.2011年,TJM-F92株弱毒疫苗问世,该毒株是由高致病性变异毒株传代致弱而制成的,传代过程中发生了重要的毒力相关基因缺失,而保持了较好的免疫原性,利用TJM-F92株Nsp2基因缺失360个核苷酸的独特分子特征和遗传标记,可用于病毒的鉴别诊断.     

95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况,采用K—B（Kirby-Bauer）法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明：仅有多黏菌素B（85．6％）、头孢噻肟（85．3％）、阿米卡星（84．8％）和大观霉素（65．0％）相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主,其中13、14、15、16和17重耐药较多,并且有26株18重耐药,14株19重耐药。采用WHONET5．4软件分析大肠杆菌耐药性,对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少,分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因,耐药基因检出率分别是aadA1（65．89％）、aaC2（52．35％）、aaC4（12．91％）和aphA3（10．95％）。耐药基因型检出率较高的是aadA1／aaC2（29．61％）、aadA1（18．04％）。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布,表明耐药基因型aadA1／aaC2（43）、aadA1／aaC2／aaC4（20）和aadA1／aaC2／aaC4／aphA3（20）在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星（68．39％）。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用,能够作为检测细菌耐药性的指示菌。