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旨在比较ALV-J-SD1005毒株和ALV-J-NX0101毒株感染鸡只致病性、诱发先天性免疫因子和致肿瘤因子表达的差异,用感染剂量为103TCID50的两株病毒分别颈部皮下接种75只1日龄海兰褐鸡,感染后7、14、21 d检测体重、肿瘤病变、死亡率、血液和皮下纤维组织中病毒含量以及肝中鸡TRIM25、MDA5、IRF7、IFN-α/β、14-3-3σ、P53、STAT1等免疫因子或肿瘤因子的mRNA表达量。结果显示,雏鸡感染ALV-J-SD1005毒株后最早于第10天出现纤维组织增生,14 d致纤维组织增生率为100%(18/18),死亡率为5.2%(1/19);随着感染日龄的增加,增生组织指数和死亡率不断升高,21 d时分别达34.4%(74.5/209.5)和58.3%(7/12)。血液和皮下纤维组织的病毒载量显著升高;同时,显著上调鸡肝中MDA5、IRF7、P53等基因的表达量,下调IFN-α/β和14-3-3σ基因的表达量;而鸡TRIM25基因呈现感染早期(7 d)表达显著下调,后期(14~21 d)表达显著上调。ALV-J-NX0101毒株感染后21 d未检测到肿瘤发生,也没有鸡只死亡,但见鸡血液等组织中病毒载量显著增多,鸡TRIM25、MDA5、IRF7、IFN-β、IFN-α基因表达显著下降,STAT1基因表达显著上调。上述结果可以看出,ALV-J-SD1005毒株与ALV-J-NX0101毒株在感染鸡体内诱发不同的抗病毒反应和抗肿瘤反应,导致产生明显不同的病毒增殖和致病特点。本研究为深入理解两株ALV-J病毒致肿瘤机制、探索新诊断标识提供重要科学依据。 相似文献
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为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达,经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体,该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达,在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内;脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中;肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中。该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据。 相似文献
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利用酿酒酵母表面展示系统展示柔嫩艾美耳球虫微线蛋白基因EtMIC2,为下一步研制活载体疫苗奠定基础。参照GenBank中柔嫩艾美耳球虫EtMIC2基因序列设计引物,以柔嫩艾美耳球虫的RNA为模板,利用RT-PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切连接到酿酒酵母表面展示的载体pCTCON2,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酿酒酵母菌株EBY100,诱导表达后,用抗EtMIC2蛋白质特异性抗体,做间接免疫荧光(IFA)检测EtMIC2蛋白的表达。结果显示,EtMIC2成功展示到酵母细胞表面,测得最佳诱导时间为48h。 相似文献
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MTT法检测鸡脾脏和外周血NK细胞杀伤活性的条件优化 总被引:1,自引:0,他引:1
选取不同日龄的SPF鸡和肉鸡,用贴壁法从血液和脾脏分离出NK细胞作为效应细胞,选择瘤细胞MDCC-MSB1和MDCC-MSBCU147分别作为靶细胞,二者按比例混合,孵育,利用MTT法检测靶细胞的活力反映效应细胞对靶细胞的杀伤活性,并对效靶比、作用时间进行比较.结果显示,MSB-1和CU147均可作为NK细胞良好的靶细胞,但CU147更稳定;效靶比为20:1~50:1,作用时间8~16 h杀伤效果稳定;50%DMF-20%SDS混合物作为裂解液能够对结晶彻底溶解,优于其他溶解试剂. 相似文献
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间接免疫荧光染色检测鸭源副黏病毒及在鸭体内的抗原定位 总被引:2,自引:0,他引:2
以抗新城疫病毒F蛋白的单克隆抗体为一抗,建立了间接免疫荧光染色法(IFA)检测石蜡切片中鸭副黏病毒(DPMV)的方法。以建立的IFA对DPMV人工感染鸭的各组织器官进行检测,结果显示:各组织器官均能检测到DPMV,但不同时间取样,阳性信号分布的器官不同。脾脏、胸腺、法氏囊、肠道、肝脏、肺脏DPMV的阳性检出率较高,表明这些器官为DPMV的主要靶器官。在所检测的阳性组织中,病毒抗原分布在细胞浆中。IFA检测石蜡切片中的DPMV具有直观、特异性强的优点,是对DPMV进行检测和抗原定位的良好方法。 相似文献
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为研究金莲花、花椒水提物体外抗鸽毛滴虫活性及对鸡胚成纤维细胞(CEF)的毒性,使用不同质量浓度的金莲花、花椒水提物分别与鸽毛滴虫共同孵育一定时间,同时设不同质量浓度的甲硝唑做为对照,分别计算药物对虫体的相对抑制率和半数抑制浓度(IC50);再采用MTT法检测药物对CEF的半数毒性浓度(TC50),计算两种中药水提物的选择指数(SI)及安全范围。结果表明,金莲花、花椒水提物体外作用48h对鸽毛滴虫的IC50分别为0.911、1.98g/L;对CEF的TC50分别为1.915、6.37g/L;选择指数分别为3.22、2.10。与甲硝唑相比,金莲花、花椒水提物质量浓度分别≥16、20g/L时与甲硝唑的抗虫活性接近。以上结果可以看出,一定质量浓度的金莲花、花椒水提物均具有一定的抗鸽毛滴虫活性,且细胞毒性较低,两者选择指数均大于1,为有效药物。 相似文献
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选取 5头装有永久性瘤胃瘘管的去势公山羊 ,以青干花生秧 +精料为基础日粮。实验采取前后自身对照的方法。第一阶段为对照期 ;第二阶段基础日粮内添加 15mg/kg·BW·d的CS87;第三阶段精料内添加 8mg/kg的F89。第四阶段精料内添加 0 .1mg/kg·BW的CIM。与第一阶段相比 ,瘤胃液中TVFA水平在第二、第三、第四阶段分别提高 17.4 7% (P <0 .0 5 )、- 12 .82 %和 3.33% ;A/P分别提高 4 .0 9%、7.73%和 0 .4 5 % ;NH3 -N含量分别提高 13.98%(P <0 .0 5 )、5 .38%和 - 9.6 8% ;AAN含量分别提高 1.2 8%、- 32 .6 9% (P <0 .0 5 )、8.33%。MCP在整个过程中没有显著变化。血液中NH3 -N在第二、第三、第四阶段分别升高 - 19.70 % (P <0 .0 5 )、6 7.4 2 % (P <0 .0 1)、- 9.85 % ;AAN分别提高 0 .4 0 %、37.6 5 % (P <0 .0 1)、8.37% ;SUN分别下降 3.4 4 %、6 .0 5 %、15 .4 8%。阶段性相继饲喂CS87、F89和CIM在一定程度上提高瘤胃发酵和氮代谢 ,促进体内对氮的吸收和利用 相似文献
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