环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验

利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法.该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45 min即可完成反应.最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性.以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果.通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR.     

环介导等温扩增技术快速诊断猪肺炎支原体

利用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法建立了猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoinae）的快速检测方法。该方法以猪肺炎支原体保守性基因16SrRNA为靶序列设计了6条特异引物,在63℃等温条件下,30min即可完成反应。结果显示,LAMP技术优于PCR技术。在敏感性实验中,LAMP方法的能检测出10个包含靶基因片段的重组质粒,敏感性高于PCR方法10倍;特异性实验中,LAMP方法和PCR方法均显示出了高度的特异性;在对127个临床鼻拭子样本的检测中,LAMP方法检测结果是所有样本都为阳性,而PCR检测出了116份阳性。证明本研究所建立的方法,对临床样本的检测的敏感度高于常规的PCR法。LAMP方法具有操作简便、快速、高效、敏感、特异、经济的特点,在研究机构以及基层实验室、现场监测的广泛使用具有一定的潜力。     

基于POE法洛阳市洛南区中心组团公园绿地调研分析

借助POE的研究方法,以年龄段、职业类型等基本信息,以及游园目的、频率、时间段选择、停留时间、景观喜好等游园特征两大方面,对洛阳市洛南片区中心组团公园绿地进行了调研分析,结合受访者对公园绿地的满意度和建议,从绿地增量提升和存量优化两个方面提出了若干优化建议。     

H9亚型禽流感病毒环介导等温扩增检测方法的建立与荧光指示剂的应用

利用反转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了一种特异、灵敏、便捷的H9亚型禽流感病毒(H9subtype of avian influenza virus,H9-AIV)的检测方法。该方法使用了对应于H9亚型禽流感病毒血凝素(hemagglutinin HA)基因的8个不同区域的6条特异引物,在63℃的等温条件下反应,最低可检测到103拷贝的目的基因重组质粒片段,较RT-PCR方法敏感10倍。通过对15种H亚型禽流感病毒、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的检测表明,该方法具有良好的特异性。在反应体系中使用钙黄绿素与Mn2+的混合溶液作为荧光指示剂可以用于RT-LAMP结果判定,并且其判断结果与浊度判断结果一致。对109份禽咽喉拭子及泄殖腔拭子临床样品进行检测,RT-LAMP与RT-PCR检出阳性样本数分别为61份和46份,表明RT-LAMP方法阳性检出率高于RT-PCR。     

风景区规划课程教学改革方法探析——以河南科技大学为例

教学改革作为促进教学的一项重要举措,应做到有的放矢。尤其是研究生课程,需针对学生不同的学科背景、教育背景和学科设置的情况,加之对教学内容的审度,最终确定改革措施和具体内容。河南科技大学的《风景区规划》课程,作为风景园林专业硕士研究生的选修课程,尝试进行教学改革。从教学对象、教学内容和教学方法等多个方面进行深入分析和研究,实施了一些的改革措施,取得了一些成效,为规划设计类专业硕士研究生的课程教学改革提供了参考。     

羟基萘酚蓝在伪狂犬病病毒环介导等温扩增检测方法中的应用

伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)传统诊断方法具有程序繁琐、周期长、成本高、特异性差等缺点,本实验建立了敏感、特异的PRV的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并在此基础上应用金属离子指示剂羟基萘酚蓝(hydroxy naphthol blue,HNB)进行反应结果判定.实验选取保守性较高的gB基因(glycoprotein B,糖蛋白gB)筛选引物,确定反应体系后,可在45 min内完成检测.LAMP方法特异性与PCR方法一致,敏感性是PCR方法的100倍,最低能够检测10个拷贝的目的基因.在HNB的应用试验中,发现LAMP反应体系中,HNB浓度为150 μmol/L时,阴阳性的颜色对比明显且反应的敏感性最高,可用于LAMP扩增产物的判断.临床样本的检测结果表明,PCR方法和LAMP方法的检出率一致.因此,本研究中所建立的LAMP方法是一种高度特异敏感的,可替代PCR方法的检测技术.     

犬外耳炎的临床调查

外耳炎是一种犬猫耳道常见疾病,出现的异常包括外耳道上皮组织急性或慢性感染,有时可以侵染到耳廓。其临床表现包括耳部皮肤出现红斑、脱皮、疼痛或瘙痒。据国外的一些报道,犬外耳炎发病率在5%~20%之间。笔者收集了从2005年1月至2005年12月期间,来中国农业大学动物医院化验室进行耳内分泌物化验的病例信息,总结了有病例记录的患犬的品种、年龄、性别、发病部位、主要症状、诊断结果和治疗情况等,并进行统计分析。现将其流行特点报告如下。表1 2005年1月至2005年12月病例统计1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12合计月份皮肤化验数225 166 275 190 27…     

美丽乡村发展规划设计研究——以洛阳伊滨区诸葛镇下徐马村为例

乡村发展是目前国家推进美丽中国建设的重中之重,洛阳市在2018年也提出农业农村工作要点,将落实高质量发展和农业农村优先发展的要求,是洛阳市打好精准脱贫攻坚战的关键一年。本文以洛阳市伊滨区诸葛镇下徐马村为例,概括了该村的具体情况,对村庄的主要问题进行了梳理,针对这些问题对该村落的弊端提出了规划实施方案,旨在对提升村庄整体风貌,推动村庄全面发展给出技术指导。     

西藏草坪退化原因及其复壮技术

西藏林芝地区八一镇是青藏高原水热条件较好的"森林小镇",镇上建植的草坪很多,但均发生不同程度的退化。通过探讨草坪退化主要是养护管理不及时等原因,提出了更新复壮技术。     

荧光显色在环介导等温扩增（LAMP）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的应用

介绍了一种应用荧光显色的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)的检测方法.该方法使用了针对靶序列M+N基因的一组引物,并且能在63 ℃等温条件下30 min内完成反应.在敏感性检测中RT-LAMP与RT-PCR都能检测103个包含靶基因片段的重组质粒.几种其它病原的核酸也被用来比较这两种方法的特异性,两种方法只能检测PRRSV.在荧光显色剂应用试验中,证实0.05 mmol/L钙黄绿素以及0.6 mmol/L锰离子可以用于LAMP扩增产物的判断,并且其判断结果与浊度判断结果一致.在对103个临床血液样本的检测中,RT-LAMP与RT-PCR检出的阳性样本数量分别是56个和48个.结果说明,应用荧光显色剂的RT-LAMP检测方法可以快速检测PRRSV.