中国农村基层民主政治程序化的历史探析

农村基层民主的真正有效实现,很大一部分取决于能否达到农村基层民主政治的程序化。本文对建国以来各个时期农村基层民主程序化的建设进行了历史考察,认为我国农村基层民主政治程序化发展,大致分为孕育、探索创新、全面开展、逐步完善四个阶段。形成了中国特色农村基层民主政治程序化的显著特征,积累了极其宝贵的经验。     

豹纹鳃棘鲈酪氨酸酶Tyr基因家族的结构特征及组织表达分析

酪氨酸酶蛋白家族(tyrosinase gene family)是一类调控黑色素合成的关键酶, 在黑色素细胞形成的过程中起着不可替代的作用, 然而 Tyr 基因家族在东星斑体色形成中的潜在机制尚不清楚。豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)俗称东星斑, 是我国重要的热带经济养殖鱼类, 但是人工养殖的东星斑因环境等变化而逐渐出现体色变淡或者变黑的现象, 严重影响其品质和经济价值。本研究从东星斑全基因组中共筛选鉴定获得 5 个 Tyr 基因家族成员, 氨基酸序列比对结果显示不同物种间的同源基因保守性较高, 尤其是 Tyr 家族典型的酪氨酸酶功能域在不同物种各成员之间均具有高度保守性。系统发育和共线分析均显示东星斑 Tyr 基因家族进化过程中存在基因复制和丢失现象。此外, 荧光定量 PCR 结果表明 Tyr 基因家族所有成员在东星斑黑色个体的皮肤组织中表达量均显著高于红色个体(P＜0.05)。本研究初步鉴定和分析了东星斑 Tyr 基因家族在其体色形成中的作用, 旨为深入解析东星斑酪氨酸蛋白酶基因家族的进化及功能机制提供依据。     

NDGA对红颜草莓脱落酸及其关键调控基因表达的影响

采用不同浓度的ABA合成抑制剂NDGA处理红颜草莓果实,通过测定草莓果实不同时期脱落酸及成熟着色相关生理指标以及ABA代谢相关基因的变化,以了解NDGA对脱落酸及其关键调控基因表达的影响。结果表明,NDGA能有效抑制可溶性糖和天竺葵素葡萄糖苷的合成,且在一定范围内浓度越高,抑制作用越明显。一定浓度的NDGA处理可以抑制FaNCED的表达,并促进FaCYP707A、FaBG1和FaCHLH在草莓果实褪绿期的表达。该结果为进一步揭示NDGA抑制脱落酸代谢的机制提供了研究基础。     

草莓PIF3基因的克隆及表达分析

光敏色素互作因子(phytochrome-interacting factors, PIFs)是一类bHLH转录因子。为探究其基因功能,本研究根据预测的栽培草莓(Fragaria×ananassa) PIF3序列设计引物,从‘红颜’(cv.Benihoppe)草莓中克隆得到FaPIF3的编码区及启动子区序列,其开放阅读框(ORF)长度为2 121 bp,编码706个氨基酸残基。生物信息学预测表明,FaPIF3具有HLH家族保守结构域,而无跨膜结构域和信号肽;系统进化树显示,该蛋白与蔷薇科植物具有很近的亲缘关系。通过获得的2 652 bp的启动子区序列进行启动子元件预测,发现FaPIF3具有大量的光响应元件。半定量PCR显示,FaPIF3在草莓果实成熟期间表达量稳定,在花和嫩叶中表达量较高。亚细胞定位结果证实,Fa PIF3位于细胞核内。     

草莓Fra a基因的克隆与原核表达

草莓Fra a是一类过敏原蛋白。为研究Fra a蛋白致敏机理,本研究根据已知的栽培草莓(Fragaria×ananassa)Fra a序列设计引物,从"红颜"草莓中克隆得到三个Fra a基因序列,其ORF长度分别为483 bp、483 bp和480 bp,各自编码160个、160个和159个氨基酸,分别命名为Fa Fra a 1、Fa Fra a 2和Fa Fra a 3。生物信息学预测表明其均具有bet v 1家族保守结构域,预测蛋白均无跨膜结构域和信号肽。Fa Fra a 1与桃的氨基酸相似度为81%,李、杏为80%;Fa Fra a 2与月季的氨基酸相似度为82%,苹果、樱桃为81%;Fa Fra a 3与月季的氨基酸相似度为92%,苹果为83%。Fra a与蔷薇科植物的进化关系更近。构建原核表达载体pET32afraa1、pET32a-fraa2和pET32a-fraa3,转化到大肠杆菌BL-21(DE3)p Lys S菌株并诱导融合蛋白表达,结果表明目的蛋白Fra a 1、Fra a 3在原核表达系统中能顺利表达,Fra a 1在上清、沉淀中均有大量分布,Fra a 3主要存在于沉淀中。未得到Fra a 2目的蛋白。本研究为进一步了解Fra a的功能和制备抗体提供了理论依据。     

草莓MYB类转录因子FaMYB5基因的克隆与表达分析

以丰香草莓（Fragaria ×ananassa cv. Toyonaka）为试材,通过同源克隆技术获得FaMYB5基因全长编码序列,运用生物学软件对该序列进行相关生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法对FaMYB5基因在果实不同发育阶段的表达模式进行研究。FaMYB5基因的cDNA全长为822 bp,编码273个氨基酸,蛋白质分子量为29159 ku,等电点为5709,与森林草莓的FvMYB5同源性达957%。实时荧光定量PCR分析显示,随着果实发育成熟,FaMYB5基因的表达逐渐上升。在果实的小绿期（SG）,FaMYB5基因的表达量最低。但是在白果期（WT）出现1个降低的峰值,其表达量略高于小绿期,草莓果实开始转红时其表达量又逐渐上升,在果实全红期（FR）达到最大。结果获得了丰香草莓MYB类转录因子FaMYB5基因的cDNA全长,其表达存在差异。