纤维素酶辅助提取油莎豆粕中淀粉的工艺研究

试验以油莎豆粕为原料,采用纤维素酶辅助提取油莎豆粕中的淀粉,并对提取条件进行优化,获得高提取率淀粉。以淀粉提取率为评价指标,在单因素试验的基础上选择加酶量、酶解时间、酶解温度、pH 4个主要影响因素进行正交试验,确定最佳的提取工艺条件。结果表明：加酶量、酶解温度以及酶解时间与酶解温度的交互作用对淀粉提取率有显著影响,油莎豆粕淀粉的最佳提取工艺条件为加酶量1.25%、酶解温度47℃、pH 5.5、酶解时间为5 h,淀粉提取率为77.67%。     

阿司匹林诱导大鼠肠道损伤模型的构建

本试验旨在建立阿司匹林诱导的大鼠肠道损伤模型。试验采用单因素试验设计,选用6周龄SD大鼠18只,经过7 d的适应性饲养后随机分为3个组,每组6只,单笼饲喂。模型1组和模型2组阿司匹林的灌胃剂量分别为50和200 mg/kg,空白对照组灌胃等量生理盐水,持续灌胃14 d。结果表明:与空白对照组相比,灌服50 mg/kg阿司匹林显著降低了大鼠的体增重、血清白细胞介素-2(IL⁃2)含量、肠道黏膜分泌性免疫球蛋白A(sIgA)含量、肠道绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度的比值(P<0.05),但对肝脏指数、脾脏指数和血清溶菌酶(LZM)活性没有显著影响(P>0.05);灌服200 mg/kg阿司匹林显著降低了大鼠的体增重、肝脏指数、血清IL⁃2含量与LZM活性、肠道黏膜sIgA含量、肠道绒毛高度和隐窝深度及二者的比值(P<0.05)。在本试验条件下,采用200 mg/kg剂量的阿司匹林连续灌胃14 d可以成功建立大鼠的肠道损伤模型。     

甘露二糖、甘露三糖体外抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞的黏附作用研究

试验以猪小肠上皮细胞(IPEC-1)为模型,探讨甘露二糖和甘露三糖抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞黏附、侵袭和损伤的影响。在IPEC-1细胞培养基中分别加入甘露二糖和甘露三糖,使培养基中甘露二糖和甘露三糖终浓度分别为0(对照组)、5、10、20μg/mL和40μg/mL。采用平板计数法检测甘露二糖和甘露三糖对IPEC-1黏附与侵袭的影响;建立大肠杆菌诱导细胞损伤模型,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测甘露寡糖对细胞损伤的修复作用。试验结果表明:与对照组相比,甘露二糖和甘露三糖能显著抑制大肠杆菌对IPEC-1细胞的黏附与侵袭,且随着甘露二糖和甘露三糖浓度的增加,其抑制效果增强,具有剂量效应,甘露二糖、甘露三糖浓度在40μg/mL时,其对大肠杆菌的黏附抑制达到最强;甘露二糖、甘露三糖能降低大肠杆菌对IPEC-1细胞的损伤。甘露二糖和甘露三糖能抑制致病性大肠杆菌对IPEC-1细胞的黏附、侵袭和损伤,保证细胞的完整性。     

猪IgGⅡB类Fc受体基因剪接异构体的克隆及序列分析

根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体(swFcγ RⅡB)cDNA基因序列,利用Primer软件设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγ RⅡB基因,将扩增的基因片段插入pTG19-T载体进行测序,利用DNAStar Protean软件对基因的氨基酸序列潜在抗原表位进行预测.结果表明,克隆的swFcγ RⅡB基因序列长度为951 bp,编码316个氨基酸,与已发表序列的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99 3%和98.3%,其胞内区多出19个氨基酸的插入,其氨基酸序列至少存在3个潜在优势抗原表位的区域.swFcγ RⅡB基因存在亚类,所克隆基因是swFcγ RⅡB基因的1种RNA剪接异构体,预示了swFcγ RⅡB基因至少存在2种RNA剪接异构体.     

FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用

将PRRSV Hn-1/06株阳性血清（中和效价为1∶2）做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞（PAM细胞）表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株NSP2和GP5基因遗传变异分析

扩增了自2006-2009年间从河南省不同地区分离的9株PRRSV株NSP2和GP5编码基因,并进行了序列测定和分析。结果显示,9株分离株NSP2全长2 850～2 937 bp,编码950～979个氨基酸,GP5基因全长603 bp,编码200个氨基酸,与CH-1a株比对,其中有7株分离株的NSP2基因均出现30个氨基酸的缺失。对9株分离株NSP2和GP5基因进行核苷酸序列分析并绘制进化树,结果表明,9株河南分离株都属于美洲型毒株,对9株PRRSV分离株NSP2和GP5基因同时进行序列分析,比较其变异结果是否一致,为进一步探寻PRRSV流行株遗传变异规律奠定了基础。     

猪Fc受体γ亚单位基因克隆与原核表达

应用RT-PCR技术从90日龄健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-FcRγ,成功表达了分子量约为29 kDa的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白FcRγ-His免疫小鼠,制备获得鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶8 000。Western-blotting结果表明,制备的鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体可以与重组γ亚单位蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。成功克隆出猪Fc受体γ亚单位基因并表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。