千里光植物化学预试及抗菌有效部位化学成分检查

采用试管分项提取预试法、系统提取预试法和圆形纸层析预试法，对千里光进行了植物化学成分预试；利用硅胶G薄板层析法，喷雾Ehrlich试剂，对千里光全草及其抗菌有效部位中双稠吡咯啶生物碱进行了检查。结果发现，千里光全草含有黄嗣及其甙类、葱醌及其甙类、酚类、强心苷、氨基酸、鞣质、皂甙、有机酸和生物碱、不含氰甙、多肽、蛋白质、内酯、挥发油和油脂；千里光全草含有双稠吡咯啶生物碱，但千里光抗菌有效部位中则未检出双稠吡咯啶生物碱。     

抗Luman募集因子N端单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】制备抗Luman募集因子N端(Luman-recruiting factor N terminal,LRF-N)蛋白的单克隆抗体。【方法】PCR扩增LRF-N端的194bp序列,构建LRF-N重组质粒pGEX-LRF-N,转染BL21(DE3)菌,诱导表达并纯化GST-LRF-N融合蛋白,以其作为抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,免疫4次,每次间隔10d,第4次加强免疫3d后采取小鼠脾脏,分离脾细胞,与SP2/0细胞融合,用ELISA和Western blot进行阳性细胞株的筛选和鉴定,对获得的杂交瘤细胞的细胞核型、分泌稳定性以及所分泌的单克隆抗体进行鉴定。【结果】pGEX-LRF-N在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,GST-LRF-N蛋白分子质量约为33ku,与预期结果一致。试验共获得3株稳定分泌抗LRF-N抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2AC9、2AG10和3G7。单抗2AC9、2AG10、3G7能够特异性地识别GST-LRF-N蛋白,亚型鉴定结果显示,其重链分别为IgG2a、IgM和IgG1。【结论】获得的抗LRF-N抗体的杂交瘤细胞株2AC9、2AG10、3G7单抗特异性良好,能够稳定分泌抗体,可用于小鼠LRF蛋白生物学功能及活性的进一步研究。     

千里光提取物的小鼠骨髓微核试验

制备了千里光70%乙醇提取物冻干粉,用昆明种雌雄性小鼠进行了该提取物的微核试验。结果发现,在雌性小鼠,中、高剂量的千里光70%乙醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高,而低剂量(130.9mg/kg)千里光70%乙醇提取物不能引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高;在雄性小鼠,高剂量(1309.0mg/kg)千里光70%乙醇提取物能够引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高,而低、中剂量的千里光70%乙醇提取物不能引起小鼠骨髓细胞微核发生率升高;而且小鼠骨髓细胞微核发生率与千里光70%乙醇提取物具有剂量依赖性。说明千里光70%乙醇提取物仅在较高剂量时能够对小白鼠产生致突变作用。