两次输精技术对母猪繁殖效率的影响

以长大二元杂种经产母猪为研究对象,应用SPSS 19.0软件的单因素方差分析对8 246头母猪的配种模式进行分析,以探讨两次输精对母猪繁殖效率的影响。研究结果表明,2次输精母猪的分娩率、胎均总仔数和胎均健仔数等指标与输精3次及以上的差异不显著;此外2次输精中的母猪静立发情至第1次输精间隔在9~17 h时,分娩率达到95.43%(P0.01),且母猪的繁殖效率最大为1 176头;第1次与第2次输精的间隔时间在16~17 h时,胎均总仔数为12.53头(P0.05),胎均健仔数为11.03头(P0.05),同时分娩率达95.59%,繁殖效率达1 192头,均为最高。因此,两次输精技术是可行的。     

猪RUVBL2真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

RUVBL2(RuvB-like 2)蛋白是进化上高度保守AAA+(ATPases Associated With Diverse Cellular Activities,AAA)家族成员之一,CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞被广泛地用于表达重组DNA蛋白。为探究猪睾丸组织的RUVBL2基因是否能够在CHO细胞中表达,本实验以猪睾丸组织的cDNA为模板,PCR扩增RUVBL2目的基因,并将其克隆至pIRES2-EGFP(Mammalian Expression Vectors pIRES2-EGFP)载体上,进一步转化到DH5α中,再进行PCR、酶切及测序鉴定;将重组质粒转染到CHO细胞中,再进行荧光、RT-PCR、Western blot检测。结果显示:PCR、酶切及测序都证实了RUVBL2基因正确地插入到了载体质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点;荧光、RT-PCR、Western blot也证实了RUVBL2基因在CHO细胞中的成功表达。本实验成功构建了猪的pIRES2-EGFP-RUVBL2真核表达载体,并证实了猪睾丸组织中的RUVBL2基因能够在CHO细胞中表达。     

烯丙孕素内服溶液对后备母猪同期发情诱导作用及其分娩影响的评估

本研究通过田间试验评价进口烯丙孕素内服溶液对性成熟后备母猪同期发情的诱导效果和其对母猪产仔的影响。先后筛选210日龄以上的120头健康后备母猪,随机分为药物受试组和空白对照组,每组60头。药物受试组和空白对照组分别按20 mg/（头·d）口服5 mL进口烯丙孕素内服溶液和饮用水,连续给药18 d。试验中记录各组动物发情时间、妊娠时长、分娩结果（窝产总仔数、窝产活仔数、窝产健仔数）等,计算各组母猪的发情率、同期发情率、妊娠率、分娩率等指标,采用SPSS21.0进行显著性差异分析。结果显示：药物受试组和空白对照组的母猪发情率分别为95.00%和81.67%(P<0.05),其中药物受试组猪在给药结束后第3天开始出现发情,24 h同期发情率为35.00%,48 h同期发情率为68.33%,而空白对照组试验猪发情时间离散,无集中发情规律;2组母猪平均妊娠时长、断奶后平均发情时长、平均窝总仔、窝产活仔和窝产健仔数、仔猪断奶后平均窝重无显著差异。由此可见,烯丙孕素内服溶液可有效诱导母猪同期发情,且对母猪生产无不良影响。     

猪肉可追溯凭证管理系统设计与实现

目前虽然存在一些成功的猪肉安全可追溯系统,但它们一般是由某家大型企业建立,是基于数据库的集中式管理,与涉及多阶段、跨部门和分布式的猪肉安全可追溯的现状还不完全一致.为了能够实现可追溯,各阶段的凭证需要将上下游数据进行关联,实现这种关联就是凭证管理.为此,基于信息安全技术,设计了猪肉可追溯凭证管理系统并针对农贸市场猪肉摊档销售的凭证管理系统进行实现.该系统能够实现凭证管理的一致性、完整性和不可否认性,具有较好的应用与推广价值.     

猪人工授精技术的应用

猪人工授精技术是以种猪培育和商品猪生产为目的,进行科学养猪、实现养猪生产现代化的重要手段,具有以下优点:一是提高优良公猪的利用率,促进品种改良和提高商品猪质量及其整齐度;     

miRNA在哺乳动物配子发生中的作用研究进展

哺乳动物配子发生的基因表达调控包括编码基因的阶段特异性表达调控及非编码基因的转录和转录后水平调控。微小RNA(microRNA, miRNA)作为一类小的非编码RNA, 通过识别靶基因非翻译区的结合位点, 导致mRNA降解或者蛋白质翻译抑制, 从而在转录后水平发挥调控作用。近年来, miRNA在哺乳动物生殖活动中的作用逐渐被揭示, 越来越多的研究表明, miRNA在哺乳动物精子发生、精子成熟、卵母细胞成熟、卵泡发育及早期胚胎发育等过程中都发挥着重要的调节作用, 其可通过调节支持细胞的增殖和凋亡或精原细胞、精母细胞及精细胞的细胞周期进程, 在精子发生的不同阶段发挥间接或直接调控作用, 也可通过调节卵母细胞、卵丘细胞以及颗粒细胞的增殖、凋亡、激素合成和细胞间作用, 对卵母细胞的发育和成熟过程进行调控。作者主要介绍了在哺乳动物配子发生过程中, miRNA的细胞和阶段特异性表达及其对靶基因的调节作用, 以期为深入研究哺乳动物配子发生的调控机制提供参考。     

猪传染性疾病引起的繁殖障碍

理想母猪的繁殖能力应为每年断奶３１２头仔猪，这是根据以下数据计算而得的：妊娠期：１１４天；哺乳期：２１天；再配种间隔天数：５天；共计（产仔间隔）＝１４０天。３６５天／年÷１４０天／窝＝２６窝／年；２６窝／年×１２头／窝＝３１２头断奶仔猪／年。在美国，每头母猪平均每年断奶１４头仔猪，这还不到以上理想数值的一半。这一低繁殖率的主要原因就是各种传染性和非传染性病症。本文介绍了传染性疾病所致猪繁殖障碍的原因、症状、控制、预防及治疗等。猪的繁殖障碍可由以下一种或数种传染病引起：细小病毒病，肠病毒感…     

不同培养液对昆明小鼠体外受精率及早期胚胎体外发育的影响

在TYH受精液中添加促卵泡素（FSH）和苯甲酸雌二醇（E2），检测不同浓度的FSH和E2对昆明小鼠的体外受精率的影响；检测在M16、CZB两种培养液中添加胎牛血清（FCS）与否对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响．结果表明：在．rYH中添加1．0IU／mL FSH，受精率和2-细胞胚率显著高于对照组；在TYH中添加0．1μg／mL E2，受精率和2-细胞胚率也显著高于对照组．在CZB中添加体积分数为10％FCS，可显著减少2一细胞期体外发育阻断，并显著提高小鼠胚胎体外发育的囊胚率，可见，以TYH添加1．0IU／mL FSH和0．1μg／mL E2为受精液，以含体积分数为10％FCS的CZB为胚胎培养液，小鼠胚胎可获得较高的囊胚率．葡萄糖并不是小鼠胚胎形成囊胚所必需的．     

利用CRISPR/Cas9系统构建可诱导型猪Sohlh1基因敲除细胞系

目的 将Tet-on系统与CRISPR/Cas9系统相结合建立诱导敲除猪Sohlh1基因的细胞系。方法 分离培养猪胎儿成纤维细胞(PFF),进行慢病毒载体PCW-eSpCas9(1.1)侵染并通过1 μg/mL嘌呤霉素筛选及强力霉素(Dox)诱导;改造pLV-sgRNA载体,进行293FT细胞转染验证;构建含Sohlh1基因目标靶点的pLV-sgRNA-2A-GFP特异性载体,进行慢病毒包装检测;利用包装病毒侵染稳转PCW-eSpCas9(1.1)的PFF细胞,3 μg/mL灭稻瘟菌素进行筛选,随后添加Dox诱导进行表达分析和敲除效率检测。结果 建立了受Dox调控可诱导eSpCas9(1.1)蛋白表达的PFF细胞系,不添加Dox,eSpCas9(1.1)蛋白不表达;293FT细胞表达绿色荧光,表明pLV-sgRNA-2A-GFP载体改造成功。3、4、6号Sohlh1基因靶点具有敲除活性,利用最优的2个靶点构建了pLV-sgRNA-2A-GFP特异性载体,荧光表达显示载体慢病毒包装成功。构建稳转PCW-eSpCas9(1.1)和pLV-sgRNA-2A-GFP的PFF,经Dox诱导72 h后,Sohlh1基因的敲除效率为85%。结论 利用Tet-on系统和CRISPR/Cas9系统成功构建了可诱导型猪Sohlh1基因敲除细胞系,为研究Sohlh1基因的功能以及制备条件性敲除Sohlh1基因去除生殖细胞的模型猪奠定了基础。     

全氟辛酸对小鼠卵母细胞的毒性影响

【目的】研究全氟辛酸(Perfuorooctanoic aid,PFOA)对小鼠卵母细胞的毒性影响。【方法】选用6周龄体质量相近的昆明雌性小鼠160只,分为4组,每组5个重复,每个重复8只小鼠。在适应环境7 d后开始对小鼠灌服不同剂量的PFOA,其中,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组的每日剂量分别为0、 5、 10和20 mg/kg,连续灌服14 d,然后利用孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和人绒毛促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,hCG)对各组小鼠进行超数排卵,获取卵母细胞进行检测。【结果】与对照组相比,PFOA中、高剂量组小鼠的卵母细胞成熟率分别下降了14.28%、28.17%;卵母细胞内活性氧含量分别升高了135%、177%;而且卵母细胞β-tubulin形态异常,染色体非整齐排列的比例分别升高了65.06%、75.60%。此外,低、中、高剂量组PFOA处理后小鼠的卵母细胞内磷酸化组蛋白H2AX(Phospho-histone H2A.X,P-H2A.X)比例分别比对照组升高了...