浅谈家庭农场在农业技术推广中的作用

家庭农场属于一种新型农业生产形式，具有规范化、机械化、集约化、规模化的特征，能够促进农业技术的推广、工作质量的提高，因此，充分发挥家庭农场在农业技术推广中的作用至关重要。在实际生产中，我国农业技术推广工作虽然有了较大发展，但是受人为因素及外部客观因素的影响，依旧存在较多问题。文章主要阐述了家庭农场在农业技术推广中的作用，并提出了相关建议，以供参考。     

保定地区猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是为无囊膜单股环状负链DNA病毒,病毒粒子直径约17～20 nm,是迄今已知最小的动物病毒之一.PCV属于圆环病毒科圆环病毒属成员,根据其致病性及抗原性将它分为两个血清型,即PCV1和PCV2.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF6基因的克隆及原核表达

从河北沧州分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经4代盲传,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为HB-3(cz)株。根据GenBank公布的PRRSV JXA1株ORF6基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物(P1/P2),用RT-PCR方法扩增完整ORF6基因,将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌,阳性重组质粒PGM-M进行序列测定与分析。后将克隆质粒PGM-M双酶切后连接原核表达载体pET-32a(+),在Rosseta-DE3中成功获得表达,经Western-blotting分析表明,表达蛋白与阳性血清发生特异性反应。     

一例产蛋鸭感染新城疫的诊治

<正>鸭感染新城疫的病例报道较少,一般认为鸭子虽带毒却不发病,但笔者于2009年11月份遇到产蛋鸭感染新城疫的病例,现报道如下。1发病情况2009年11月份德州某养殖户饲养的产蛋鸭3000余只,220日龄时开始出现大批死亡,刚开始时每天死亡7～8只,病鸭精神沉郁,采食量下降,产蛋率迅速下降,死亡量很快上升,达每天死亡70～80只,起初怀疑是禽流感,曾用过干扰素、金刚烷胺、壳寡素、免疫球蛋白等,均没有获得很好的疗效,死亡量降至每天20~30只。淘汰900余只,淘汰率为35%左右,损失3万多元。     

高致病性PRRSV河北地方株的分离鉴定及部分Nsp2基因变异分析

从唐山某猪场患高热病病料中分离到1株病毒,该病毒能在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型PRRSV,将其命名为TS02。应用设计的特异性引物扩增TS02株的Nsp2基因,并与国内外PRRSV分离株的Nsp2基因序列进行了比较。结果表明,TS02株Nsp2基因推导的氨基酸序列出现30个不连续的缺失,与PRRSV高致病性毒株JXA1、GD、WUH1、Jiangxi-3的核苷酸序列同源性分别为97.7%、97.7%、96.5%和97.1%。     

河北猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3(cz)株N基因变异分析及原核表达

为了给河北地区预防和控制猪繁殖与呼吸综合征提供理论数据。应用RT-PCR方法特异性扩增HB-3(cz)株的ORF7(N)基因片段,将扩增片段克隆入pMD-T载体后测序,应用DNAstar分析软件对序列进行分析,并与GenBank中发表的PRRSV毒株序列进行比较。结果显示:HB-3(cz)株与高热病毒株JXA1、HUB2等及传统河北分离株HB-1(sh)氨基酸同源性高达97.6%,属美洲型毒株。将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,重组质粒pGEX-N转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达,经Western-blot-ting分析表明:表达的融合蛋白分子量约为39.5 kDa,能与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,为PRRSV血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

河北省鸭肝炎病毒的分离鉴定和病毒的细胞培养

从某鸭场疑似鸭病毒性肝炎的发病雏鸭及病死雏鸭肝脏中分离到1株病毒，经鉴定为鸭肝炎病毒。利用鸭胚肝细胞培养病毒，呈现典型CPE，向细胞维持液中加入1％的鸭胚尿囊液，CPE的维持时间可延长至60小时。将病毒的细胞培养物回归鸭胚和雏鸭．其致病力不见明显减弱。     

河北地区猪圆环病毒二型ORF2基因片段的克隆与原核表达

以PCV2 PK-15细胞毒提取的DNA为模板,用PCR扩增PCV20RF2基因的后部约600 bp片段;对PCR产物回收纯化后与载体pMD19-T进行连接、转化,经酶切和序列分析后亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-ORF2,转入大肠埃希氏菌B121(DE3)中,以IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting分析.结果表明.重组表达质粒在大肠中所表达的融合蛋白相对分子量为40 kDa,Western-blotting分析表明该蛋白具有PCV2抗原性.     

鸡传染性法氏囊病毒3个毒株VP2高变区的基因扩增与序列分析

以用疫苗株V-hb和V1免疫后又发病的病鸡法氏囊分离毒株HeB-bdI的基因组RNA为模板,利用RT-PCR/Nested-PCR扩增出了cDNA产物.并对其VP2高变区基因序列测定,同时测定了V-hb和V1的基因序列.序列分析表明HeB-bdI毒株与UK661同源性较高为98.4%,而与弱毒株Cu-1、非致病性株PBG98和变异株相差较大;而疫苗株V-hb和V1疫苗株与HeB-bdI毒株的同源性较低仅为93.1%.     

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

应用柠檬酸三钠还原法制备了20 nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒.证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点.