腐败组织中毒鼠磷的GC／NPD、GC／ECD检验

本文初步建立了一套混合溶剂提取、中性层析氧化铝小柱净化及GC／ECD和GC／NPD分析的腐败生物样材中毒鼠磷的检验方法。GC／ECD的检出限为1ng;GC/NPD的检出限为20ng。     

小麦近缘野生种抗除草剂Dalapon变异体的筛选

为了发掘小麦近缘野生种抗除草剂资源,用在培养基中添加除草剂的方法对几个小麦近缘野生种细胞系进行了变异体筛选。结果表明,从黑麦草T ove中筛选到了抗4.32 mm ol.L-1D alapon的愈伤组织,该浓度下愈伤组织存活率为0.56%;从长穗偃麦草R 123中筛选到了抗2.88 mm ol.L-1D alapon的愈伤组织,存活率为0.59%;从黑麦草N apoleon和卵穗山羊草Y 100中均筛选到了抗1.44 mm ol.L-1D alapon的愈伤组织,存活率分别为0.49%和0.56%;方穗山羊草A e42的抗性水平最低,为0.72 mm ol.L-1,愈伤组织存活率为0.33%。对存活愈伤组织进行细胞水平上的鉴定表明,其仍然保持对D alapon的抗耐性;从不同浓度D alapon下筛选到的存活愈伤组织均得到了有抗性的再生植株。在种子水平上对纤毛鹅观草进行筛选,得到了0.195%的抗性植株。     

一种快速大量提取禾谷类作物幼苗期总RNA的方法

为探索一种快速、大量提取禾谷类作物总RNA的方法,利用改良的热酚法提取禾谷类作物(玉米、水稻和小麦)幼苗期不同组织的总RNA,该方法在2.5 mL的离心管中进行,在提取缓冲液中增加了巯基乙醇,对传统的操作步骤进行了优化.提取的RNA质量较高,纯度检测表明RNA样品OD260/OD280在1.8～2.1之间,含量约为10 μg/μL.RT-PCR和Northern杂交结果表明RNA可以满足进一步分子操作的需要.     

绿色高产优质玉米新品种中玉303

提升抗逆性与适应性是促进我国玉米单产水平提高的关键。中国农业科学院作物科学研究所利用优异种质资源发掘创新的自交系,经定向测配、多环境鉴定,培育出高产、优质、多抗、广适、耐密植玉米新品种中玉303。该品种在河南省玉米区域试验(高密组)中,比对照郑单958增产12.6%,增产点率100%;在国家黄淮海夏玉米组区域试验中,比对照郑单958增产7.4%,增产极显著,增产点率90.8%,且高抗茎腐病,抗小斑病,后期持绿性好,籽粒淀粉含量高达75.96%。2020年分别通过国家和河南省农作物品种审定委员会审定,由安徽隆平高科种业有限公司在黄淮海夏玉米区推广应用。在2021年大面积示范推广中,尽管气候灾害等多种逆境共同胁迫,中玉303综合性表现突出,显示出广阔的市场前景。     

猪流行性腹泻病毒S蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

猪流行性腹泻病（porcine epidemic diarrhea,PED）是一种高度接触性肠道传染性疫病,主要危害1周龄以内的仔猪,仔猪感染死亡率高达100%,是目前危害世界养猪业的主要疫病之一。本研究旨在制备针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的特异性纳米抗体并鉴定其结合活性。作者原核表达并纯化PEDV S1蛋白,将纯化后的PEDV S1重组蛋白免疫双峰驼,第4次免疫后分离其外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞RNA,反转录得到cDNA,通过巢式PCR扩增VHH片段,并构建至pCANTAB-5E载体中,电转化至TG1感受态细胞,得到VHH噬菌体抗体展示文库;随后,对构建的噬菌体抗体展示文库进行救援和3轮富集,利用噬菌体展示技术从中筛选针对PEDV S蛋白纳米抗体,通过ELISA验证筛选的纳米抗体的特异性和结合力。通过Western blot和间接免疫荧光验证纳米抗体与PEDV的结合活性。结果显示：成功表达并纯化PEDV S1蛋白,经4次免疫后,双峰驼血清中的特异性抗体效价达到了1∶256 000。构建的噬菌体展示文库的库容量为2.1×10⁷,阳性率85%;对噬菌体展示文库3轮的淘选富集后,最终筛选出6株氨基酸序列不同的纳米抗体,ELISA结果显示,6株纳米抗体均对PEDV S1重组蛋白具有良好的结合力与特异性。随后验证了Nb3能够与PEDV结合,表明其具有良好的活性。成功筛选到针对PEDV S1蛋白的特异性纳米抗体,所筛选纳米抗体有望用于PED的诊断和治疗,同时为PEDV的致病机制研究提供抗体材料。     

分子标记辅助选择玉米杂种后代创新种质方法研究

【目的】目前,玉米生产上利用的杂交种95%以上是单交种。利用分子标记辅助选择手段探索从杂交种后代中高效发掘分别适合作父本和母本材料的方法,对于提高杂交种类资源的利用效率,推动玉米育种发展进程具有重要意义。【方法】以爆裂玉米杂交种JB1的F_1代种子作为试验材料,首先利用玉米全基因组范围内SSR分子标记,经聚合酶链式反应(PCR)扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对杂交种种皮和胚进行基因型检测,筛选多态性SSR分子标记,明确相应父、母本的基因型。在此基础上,选取10条染色体上均匀分布的多态性SSR分子标记对F_2及后续2个世代的分离群体进行逐代分子标记辅助选择,获得的后代材料可分为3组,即类父本材料、类母本材料和中间型材料。为了进一步评估所选材料的杂种优势恢复程度及在育种工作中的实际应用价值,在F_4代对类父本和类母本两组材料配制了组内、组间杂交组合;同时,利用3个测验种与基于分子标记选择获得的类父本材料、类母本材料以及在早代通过育种经验选取的优异材料进行测交试验,对最终获得的2 780个各种类型组合在北京顺义和河北蔚县2个不同环境下进行产量鉴定及综合评价。【结果】分子标记辅助选择显著提高了分离后代中材料的选择效率,F_4代辅助选择材料中,类父本材料与父本的相似度最高可达79.5%,类母本材料与母本的相似度最高可达73.7%,显著高于随机选择条件下的亲本相似度均值。不同类型辅助选择材料间保持了较大的遗传距离,最大可达86%。F_4代材料相互组配,不同亲本类型辅助选择材料组配的杂交种小区产量显著高于同类型辅助选择材料组配的杂交种。测验种组配的测交组合鉴定结果显示,本研究中与类父本材料组配的杂交种表现出较强的杂种优势,产量显著高于与类母本材料及早代通过育种经验选取的优异材料组配的测交组合,且存在产量超过原杂交种最大值的组合。【结论】利用分子标记技术作为辅助选择手段,从杂交种资源中发掘优异育种材料、开展种质创新的方法,可有效提高杂交种资源的利用效率。     

贵州玉米种质资源的抗病性鉴定与评价

对贵州省内保存的550份玉米种质资源进行了大斑病、小斑病、丝黑穗病和矮花叶病抗性鉴定，结果表明：种质资源对玉米主要病害的抗性是丰富的，不同的材料间抗性差异显著。通过鉴定，筛选出抗大斑病种质105份，抗小宽病资源17份，抗丝黑穗病资源151份，抗矮花叶病种质23份，这些抗源有的具有多抗性，抗两种以上病害的种质有47份。筛选出的抗源可提供育种者通过各种技术手段进行利用。应进一步深入研究，加大从地方品种中发掘和改良、创新种质的力度。     

玉米在不同水分条件下开花相关性状的QTL分析

Drought is one of the most important factors influencing maize yield.QTL analysis for related traits under water stress will facilitate the understanding of genetic mechanisms of drought tolerance and provide the basis of marker-assisted selection.The present study conducted QTL analysis of flowering-related traits including days to tasseling,days to silking,days to anthesis and anthesis to silking interval(ASI) under different water regimes in Xinjiang and Beijing,using 139 F_2∶3 families of A188×91 Huang 15.Totally 26 QTL were found to be associated with the flowering-related traits under normal water conditions,with the range of LOD of 2.62-8.40 and the range of phenotypic variance explained of 9.1%-43.2%.A QTL located near the marker"bnlg1176" on chromosome 8 controlled days to tasseling,days to silking and days to anthesis.Meanwhile,six QTL were found to be associated with the flowering-related traits under drought stress,with the range of LOD of 2.6-5.6 and the range of phenotypic variance explained of 9.5%-58.0%.A QTL also located near the marker "bnlg1176" on chromosome 8 controlled days to tasseling and days to silking,which could explain 16.6% and 20.5% of phenotypic variance.The genomic region near bnlg1176 on chromosome 8 is presumed to be an important region because eight QTL were found.     

栽培种花生单仁重QTL定位分析

花生(ArachishypogaeaL.)是我国重要的油料作物和经济作物,单仁重是决定花生产量和商品性的重要性状之一。本研究以大粒品种山花15号(母本)与小粒品种中花12号(父本)杂交构建的RIL群体为材料,基于高密度遗传图谱,在6个种植环境下进行单仁重QTL定位。在A04、A06、A07、B05、B07、B09和B10等7个染色体上共检测到9个与单仁重相关的QTL,这些QTL的LOD值为3.01～33.97、表型贡献率为2.61%～34.28%、加性效应值为-0.03～0.15 g、定位的物理区间为0.03～4.32 Mb,其中, qSSWA07.1是在6个种植环境下重复检测的单仁重主效QTL,qSSWA06.1和qSSWB09.1均在4个种植环境下重复检测到。qSSWA07.1和qSSWA06.1的加性效应为正,增效位点来自山花15号,qSSWB09.1的加性效应为负,增效位点来自中花12号,利用与qSSWA06.1、qSSWA07.1和qSSWB09.1紧密连锁的3个bin标记(A06:Block3344、A07:Block3373和B09:Block10032)的基因型分析了3...     

基于流量资料的管柱工具异常识别研究

注入剖面五参数测井是当前大庆油田应用最广泛的生产测井项目之一，一次测井完成伽马、流量、磁性定位、温度、压力5个参数测试，在应用资料时主要关注同位素结果反映的小层吸水状况，经常忽视流量信息。流量可以确定水嘴吸入量、分析管柱工具工作状态，尤其在判断管柱工具异常方面有其独到之处。通过介绍流量资料解释方法，结合流量曲线的变化阐述了如何识别管柱工具异常。