樱桃矮化砧木''吉塞拉6号''基因转化体系的建立

采用'吉塞拉6号'甜樱桃矮化砧木(Prunus cerasus×P. canescens)离体叶片外植体,在再生培养基附加生长素的条件下通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(p35SGUS intron)介导研究了β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的瞬时表达、稳定表达和转基因植株再生,证明了培养基中生长素(IBA或NAA)的存在可促进基因转化,转化效率比对照提高2倍以上.将500个叶片外植体与EHA105(p35SGUS intron)株系在含有生长素的培养基中共培养,获得了11个转基因株系.采用PCR分析和Southern Blotting核酸杂交,确定GUS基因已整合到矮化砧木'吉塞拉6号'植株的染色体上.组织化学染色确定了GUS基因在植株体内的表达.     

梨韧皮部特异表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因的转化和表达

 以 ‘Old Home’ 梨无菌苗叶片为外植体, 利用根癌农杆菌介导将专一在韧皮部表达启动子AtSUC2 驱动下的GUS 基因转入 ‘Old Home’中。筛选出了‘Old Home’ 梨叶片高效遗传转化的最佳条件：农杆菌和外植体在液体培养基上共培比在固体培养基上共培转化率提高5倍。 PCR分析和Southern 杂交鉴定表明GUS 基因已整合到转基因植株的基因组中,组织化学检测和Western 杂交鉴定证明了GUS 基因在转基因植株韧皮部中的表达。     

秋水仙素诱导樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'获得六倍体再生植株

 以三倍体樱桃矮化砧木'吉塞拉6号'（Prunus ceransus × P. canescens）的离体叶片为外植体,采用秋水仙素诱导处理再生出六倍体植株。将外植体首先在加有秋水仙素（50 mg. L-1）、生长素（IBA 0.5 mg. L-1）和细胞分裂素（BA 5.0 mg. L-1）的改良WPM液体培养基中培养5 d,再转移到不含秋水仙素（其它成分相同）的固体培养基上继续培养56 d,再生出形态变异明显的新梢。采用流式细胞仪鉴定染色体倍性,确定其为六倍体新梢。六倍体植株与三倍体的'吉塞拉6号'植株形态学上有明显差异。六倍体的试管苗已在大田移栽成活,并已成功高接在甜樱桃大树上。