余甘子多糖的结构表征及免疫增强作用

本试验旨在制备余甘子多糖（Phyllanthus emblica polysaccharide，PEP），通过对其结构表征进行分析，探索PEP对鸡新城疫（Newcastle disease，ND）疫苗免疫效果的影响。利用紫外光谱（ultraviolet spectroscopy，UV）、红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy，FT-IR）、高效液相色谱分析法（high performance liquid chromatography，HPLC）和扫描电镜（scanning electron microscope，SEM）分析PEP结构；选取175只1日龄河田鸡，随机分成5组，每组35只，分别为空白对照组，疫苗对照组，PEP低、中、高剂量组。除空白对照组外均用ND疫苗进行免疫，7日龄首免，并于28日龄二免。在免疫的同时，PEP低、中、高剂量组分别按照10、20、30 g·L^-1的剂量给药PEP溶液0.5 mL，疫苗对照组和空白对照组给予等量生理盐水，每天1次，连续3 d。分别于7、14、21、28、35、42和49日龄时，测定血清中新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）特异性抗体水平以及γ-干扰素（INF-γ）和白介素4（IL-4）的水平；于28和49日龄时测定外周血淋巴细胞增殖活性和T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺的比值；于49日龄剖杀后采集脾、法氏囊、胸腺和肝进行组织学观察以及检测免疫器官指数。结果表明，PEP为白色棉絮状，糖含量为（86.70±1.05）%，结构分析结果表明，PEP是含α型糖苷键的多糖，其组分均一，不含核酸和蛋白质，呈片状分布，总体结构规整且致密，单糖组成为葡萄糖醛酸（glucuronic acid，GlcA）、葡萄糖（glucose，Glu）、木糖（xylose，Xyl）和岩藻糖（fucose，Fuc），其摩尔比为0.5：8.3：1.8：0.3。动物试验结果表明，PEP能显著提高鸡血清中NDV特异性抗体、INF-γ和IL-4的水平（P<0.05），还能显著促进鸡外周血淋巴细胞增殖和T淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺的比值（P<0.05），提高免疫器官指数（P<0.05），激活脾、法氏囊、胸腺和肝等器官的免疫功能。PEP糖含量高，结构稳定，可提高机体免疫活性，具有较良好的佐剂活性，对ND具有良好的防治效果。     

短管兔耳草多糖的结构表征及其免疫调节活性研究

本试验旨在从短管兔耳草（Lagotis brevituba Maxim）中分离纯化多糖,初步分析多糖的结构表征并研究其体外免疫调节活性。采用水提醇沉法从短管兔耳草中提取粗多糖,经DEAE-52纤维素离子交换柱进行分离纯化,得到短管兔耳草多糖（Lagotis brevituba Maxim polysaccharide,LMP）。采用高效凝胶色谱法（HPGPC）、傅里叶变换-红外光谱法（FT-IR）、紫外光谱法（UV）等方法对其结构进行初步分析,并以小鼠骨髓来源树突状细胞（murine bone marrow derived dendritic cells,BMDCs）为靶细胞,采用MTT法、流式细胞术（FCM）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等对其免疫活性进行测定。结果显示：从短管兔耳草中分离到不含核酸和蛋白质的多糖LMP,得率为（18.5±1.7）%,糖含量为（89.7±1.9）%,平均分子量为3.18 ku,平均粒径为1 483.89 nm,Zeta电位为-14.81 mV。扫描电镜（SEM）和原子力显微镜（AFM）结果显示,LMP的表面光滑,呈片状分布,单链的高度在5.4 nm左右。3.13～50.00 μg·mL^-1 LMP能显著促进BMDCs增殖（P<0.05）及其表面分子（CD80、CD86、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ）的表达（P<0.05）和细胞因子（TNF-α、IL-12）的分泌（P<0.05）,同时显著降低BMDCs的吞噬能力（P<0.05）。LMP能促进BMDCs表型和功能的成熟,具有较好的免疫调节活性,可将其作为潜在的免疫调节剂。