宜春温泉中嗜热菌的分子鉴定及系统发育分析

分离纯化宜春温泉泉水中的嗜热菌并鉴定分析其系统发育多样性。将宜春温泉水在嗜热菌分离培养基上进行多次分离纯化,液体扩大培养,提取DNA、16S rRNA进行PCR扩增,将其序列送往公司检测,经Blast分析和比对,对检测结果进行系统发育分析。结果表明,宜春温泉泉水中分离并鉴定42株中度嗜热细菌。宜春温泉菌群系统发育中,以芽孢杆菌类群为主;其中,解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)和土样芽孢杆菌属(Geobacillus)占主导,其次是短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、无氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)。     

豆豉纤溶酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达豆豉纤溶酶基因。[结果]经PCR扩增可获得约1.1 kb的DNA片段。序列分析表明所克隆DNA片段包含1个1089 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。该克隆基因与所发表的豆豉纤溶酶基因序列的核苷酸序列同源性为98%,而氨基酸序列同源性达100%。[结论]所克隆的豆豉溶纤酶基因在毕赤酵母中成功表达,且表达产物具有正常的生物学活性。     

豆豉中5株产纤溶酶菌的筛选与鉴定

采用酪蛋白平板初筛的方法,从全国14种纳豆和豆豉中分离到39株具有蛋白酶活力的菌株;又以猪血粉平板进行复筛,并采用纤维蛋白平板法测定纤溶酶活力,得到5株产纤溶酶能力较强菌株,分别命名为CQDC-03、CWND-03、NCDC-02、YJND-01和FJDC-02。对其进行16S r DNA序列分析,结果表明:CWND-03、CQDC-03和Bacillus subtilis相似性为99%,NCDC-02和Bacillus subtilis相似性为98%。因而CQDC-02、CWND-03和NCDC-02认定为Bacillus subtilis,YJND-01和FJDC-02是否为Bacillus subtilis的新种还有待进一步鉴定,但确定其为Bacillus属。