小麦苗枯病菌的ITS分析及PCR检测

 小麦苗枯病菌(Clavibacter fangii,Cf)是引起小麦细菌性苗枯病的病原,本研究用16S~23S rDNA间的内源转录间隔区(internally transcribed spacer,ITS)序列通用引物L1(5'-AGTCGTAACAAGGTAGCCGT-3')和L2(5'-GTGCCAAGGCATCCACC-3')扩增Cf和其它相关细菌的基因组DNA;并对其PCR产物进行回收、克隆和测序,将所获序列和其它已报道的细菌ITS序列进行多重比较后设计出Cf的特异性引物I1(5'-TGCCAAGTCACACTGAGACGA-3')和I2(5'-CAATGATCTACCACCCTCCGA-3')。此引物可以从Cf中扩增出351bp的特异性片段,而其余参试的21个细菌PCR反应结果均为阴性。该方法可以应用于小麦苗枯病菌的快速、可靠检测。此外,本研究对多种植物病原棒形杆菌的ITS序列进行比较研究,发现其具有一定的分类意义。     

江苏省小麦苗枯病菌的遗传多样性初析

采用ERIC-PCR、BOX-PCR和ITS技术，对江苏省6个市的24个小麦苗枯病菌（Clavibacter fangii）进行遗传多样性分析，并与其他10种病原细菌进行比较。结果表明，在相似率达60％时，ITS将24个小麦苗枯病菌分成了5簇。以相似性60％为界，ERIC-PCR将34个参试菌株分为14簇，而BOX．PCR只得到9簇，暗示这两种短重复序列在基因组中的分布不同；将两者电泳图谱结合，得到介于上述两者问的结果，所有菌株被分成12簇，24个小麦苗枯病菌分布在5簇中。3种分析方法相互验证，均说明江苏省小麦苗枯病菌基因组存在显著多样性。ERIC-PCR和BOX-PCR聚类证明了小麦苗枯病菌与棒形杆菌属（Clavibacter）亲缘关系较近，与其他属细菌亲缘关系较远。ERIC-PCR和BOX-PCR扩增基因组DNA指纹比ITS图谱具有更强的多样性。     

大蒜鳞茎腐烂病的病原鉴定

从江苏太仓产蒜区及南京周边市场采集的病蒜上分离到 5株细菌和 3种真菌 ,经柯赫氏法则验证 ,均确定为大蒜鳞茎腐烂的病原菌。经细菌形态特征观察和生理生化性状测定结果表明 :g W、g 1属芽孢杆菌 (Bacillus spp .) ;g Y、g 2为欧文氏菌 (Erwinia spp .) ;g 3属红球菌 (Rhodococcu ssp .)。真菌的形态特征观察鉴定结果表明 :3株真菌F1、F2、F3分别属于黄青霉 (Penicillium chrysogenum Thom)、黑曲霉 (Aspergillus niger van Tiegh)和尖胞镰刀菌 (Fusarium oxysporum)     

无菌水常温保存番茄青枯菌的效果检测

不同 pH的灭菌水常温保存不同浓度的番茄青枯菌 ,6年后检测其存活情况。结果表明 ,灭菌水常温保存番茄青枯菌效果与初始菌浓度和无菌水 pH有关。试验表明此种方法保存番茄青枯菌是一种保存时间长 ,保存性状稳定的方法。     

几种常用植物病原细菌分子检测方法

植物病原细菌(phytobacteria)是植物上一类重要的病原菌,这些细菌能引起多种农作物、经济作物、花卉、树木及牧草上的病害。它的快速检测是病害防治、预测预报及植物检疫必不可少的重要工作。其中,以PCR为基础的分子检测技术的进步使植物病原细菌的检测更快速、灵敏和可靠。本文对近年来植物病原细菌分子检测技术进行介绍,尤其是应用广泛的ITS-PCR(intergenictranscribedspace-PCR)、ARDRA(amplifiedribosomalDNArestric-tionanalysis-PCR)、rep-PCR(repetitiveDNA-PCR)和实时荧光定量PCR(real-timequantitativePCR)技术,旨在促进我国植物病原细菌研究的快速发展。     

内蒙古糖甜菜叶斑病菌的多样性分析

采用ERIC-PCR,BOX-PCR和ITS的分析方法,对分离自我国内蒙古自治区5个市的21个糖甜菜叶斑病菌菌株进行多样性分析,并与其他12种病原细菌进行比较。ERIC-PCR揭示,在相似性80%上所有参试菌株分为26簇,而BOX-PCR只得到20个簇,暗示这两种短重复序列在基因组中的分布不同;将两者电泳图谱结合,得到介于上述两者间的结果,分为23个簇;在相似率达87%时,ITS分析将21个糖甜菜叶斑病菌菌株分成7簇。3种分析方法相互验证,均说明内蒙古糖甜菜叶斑病菌基因组存在显著多样性。ERIC和BOX聚类证明了糖甜菜叶斑病菌与短小杆菌属(Curtobacterium)亲缘关系较近,与其他属细菌亲缘关系较远。研究证明,ERIC和BOX扩增基因组DNA指纹比ITS图谱具有更强的多样性。