番茄晚疫病菌的分离与纯化

番茄晚疫病菌是一种寄生性较强的病原真菌 ,分离纯化难度较大。采用选择性培养基 (黑麦粉 50g ,琼脂15g ,水1000ml,灭菌后加入利福平20mg ,氨卞青霉素200mg和70%五氯硝基苯100mg) ,选择刚发病的症状典型的病叶 ,在显微镜下挑取晚疫病菌菌丝顶端 ,移植到平板上培养 ,待菌丝呈放射性生长 2～3d后 ,再将菌落边缘单菌丝的尖端连同培养基切下 ,置于斜面黑麦基础培养基上 ,可获得番茄晚疫病菌纯菌种。     

应用RAPD方法获得与番茄ToMV抗性基因Tm2nv连锁的分子标记

 运用RAPD技术,在番茄ToMV抗性基因Tm2^nv的F₂代群体中采用混合分组分析法(bulkedse gregant analysis,BSA)进行分子标记研究,找到了一个与Tm2^nv基因连锁的分子标记OPD20₁₇₀₀,其遗传距离为7.067cM,LOD值为16.768。     

大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的获得

以大麦黄矮病毒GPV株系的RNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,扩增出1134bp的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到pUC19的SmaI位点上并进行了序列测定,获得正向插入的重组质粒pUC19D。以KpnI和XbaI从pUC19D上切下此基因并插入质粒pEmu-mcs-N得到植物表达载体pPPI8。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴127、陕160和晋麦47,通过卡那霉素抗性筛选、PCR和PCR-Southern检测,3个品种均获得了转基因小麦植株。     

大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的 …

以大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的ＲＮＡ为模板,采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,扩增出１１３４ｂｐ的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点上并进行了序列测定,获得正向插入的重组质粒ｐＵＣ１９Ｄ。以Ｋｐｎｌ从Ｘｂａｌ从ｐＵＣ１９Ｄ上切下此基因并插入质粒ｐＥｍｕ－ｍｃｓ－Ｎ得到植物表达载体ｐＰＰＩ８。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴１２７、陕１６０和晋麦４７,通过卡那酶     

应用RAPD方法获得与番茄ToMV抗性基因Tm2nv连锁的分子标记

运用 RAPD技术 ,在番茄 To MV抗性基因 Tm2 nv的 F2 代群体中采用混合分组分析法 ( bulkedsegregant analysis,BSA)进行分子标记研究 ,找到了一个与 Tm2 nv基因连锁的分子标记 OPD2 0 170 0 ,其遗传距离为 7.0 67c M,L OD值为 16.768     

通过花粉管途径将BYDV-GPV株系缺失复制酶基因导入小麦

大麦黄矫病毒是小麦上发生的最重要的病毒。ＧＰＶ株系是我国小麦黄矮病发生的主流体株。本研究将ＧＰＶ株系３’端缺失的复制酶基因序列构建成用于转化小麦的植物表达载体,通过花粉管途径将目的基因转入小麦之中。Ｔ０及Ｔ１代的分了检测结果表明,目的基因已经整合到了小麦的染色体之中。