对绿盲蝽具有杀虫活性Bt菌株的筛选及Cry15Aa蛋白活性的研究

Bt棉有效控制了棉田主要害虫棉铃虫(Helicoverpa armigera),然而原来处于次要地位的刺吸式口器害虫盲蝽(Heteroptera:Miridae)为害逐年加重,目前对绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-Dür)有效的抗虫基因未见报道。本研究以本实验室保存的Bt杀虫基因和菌株为材料,对绿盲蝽进行杀虫活性筛选。利用本实验室先前克隆的Mtx类杀虫基因cry15Aa表达产物进行绿盲蝽杀虫活性测定,研究结果显示Cry15Aa蛋白对绿盲蝽具有一定的杀虫活性。通过杀虫活性测定,获得对绿盲蝽有效的Bt菌株20株;对这些菌株表达蛋白进行质谱鉴定,LC-MS/MS质谱鉴定结果显示,这些菌株可能含有Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ae、Cry1Af、Cry1Ag、Cry1Ah、Cry1Ba、Cry1Be、Cry8Ha等十余种对鳞翅目、鞘翅目害虫有杀虫活性的蛋白片段,并且有4株Bt菌株样品中检出了Mtx类杀虫蛋白Cry15Aa的片段。但是进一步基因鉴定结果表明,这4株菌株并不含有cry15Aa全长基因,推测这些菌株中含有Cry15类的新基因。上述研究结果表明这些菌株中可能存在对盲蝽有效的新型杀虫蛋白。本研究在发现了cry15Aa基因所表达的蛋白对绿盲蝽具有杀虫活性的同时,获得了对绿盲蝽具有杀虫活性的Bt新菌株,对绿盲蝽的生物防治具有重要的意义。     

黄曲霉拮抗菌B10-6-1脂肽类抗生素粗提物的性质与抑菌机理研究

采用酸沉醇提法从菌株B10-6-1发酵液中提取脂肽类抗生素粗提物,采用抑菌圈法确定其最低抑菌浓度及抑菌谱,考察温度、pH、蛋白酶、金属离子、EDTA等因素对其抑菌活性的影响;通过孢子萌发法和显微观察法考察脂肽类抗生素粗提物对黄曲霉(Aspergillus flavus)菌孢子萌发和菌丝的作用。结果表明,脂肽类抗生素粗提物的最低抑菌浓度为4 g/L,在40℃,pH为8时抑菌活性最高;温度、pH、蛋白酶、金属离子、EDTA对脂肽类抗生素粗提物抑菌活性都没有较明显的影响;该粗提物抑菌谱广泛,对白菜黑斑菌、小麦纹枯菌等9株真菌都有明显抑制作用。脂肽类抗生素粗提物处理菌丝可使菌丝细胞壁出现消融,并使孢子的萌发率降低,即该物质是通过抑制黄曲霉菌孢子萌发和菌丝生长起到抑菌作用的。     

饲用产甘露聚糖酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及其对肉鹅生长性能影响的研究

为了筛选一株产甘露聚糖酶的芽孢杆菌,并考察其对肉鹅生长性能的影响,本试验采用刚果红平板变色圈法进行产甘露聚糖酶芽孢杆菌的初筛,通过液体发酵测定酶活力的方法展开复筛,并进行动物安全性和胃肠道耐受性试验。通过形态特征观察、生理生化试验和16S rDNA全序列分析与发育树构建将其鉴定到种。制备该菌菌剂,并将其按0.10%、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%添加于肉鹅日粮中,考察其对肉鹅日增重和料重比的影响。结果表明：筛选到产甘露聚糖酶的菌株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtils） Y-3-2,其产酶活力为45.939 U/mL,耐受pH 2.0,在0.1%的胆酸盐溶液和人工肠液中可正常生长。将其制成菌剂,在肉鹅日粮中按0.25%添加,可使试验组肉鹅日增重较对照组提高8.78%（P<0.01）,料重比降低6.69%（P<0.01）。以上结果说明在肉鹅日粮中添加本试验筛选出的产甘露聚糖酶芽孢杆菌可提高肉鹅的饲料利用率,对肉鹅的生长有显著促进作用。