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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达 总被引:4,自引:1,他引:4
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE,将其克隆到原核表达载体pET-32中,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒,构建pET32-mE质粒;用IPTG在不同条件下诱导表达,确定最佳表达条件,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,重组蛋白是分子质量为41ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5mmol/L,温度为37℃、诱导4h时目的蛋白的表达量最大,约占菌体的32%。Western-blotting试验表明,目的蛋白可被羊痘血清识别。 相似文献
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本试验主要对枸杞内生真菌(GQ-16-1)所生产的红棕色素的稳定性进行初步研究,通过组织块法、平板划线法,从中药材枸杞中分离纯化得到1株产红棕色天然色素的菌株(GQ-16-1),采用固体培养,萃取,离心提取色素,采用比色法、单因子研究法初步研究色素稳定性。结果表明,该红棕色素易溶于水,微溶于乙酸乙酯,最大吸光值出现在350nm处。该色素耐酸碱,耐高温,在p H值2~10稳定,偏碱性颜色加深,在温度20~100℃稳定。金属离子Ca~(2+)、Na~+、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Fe~(2+)、Mg~(2+)、Ba~(2+)、K~+(只含一种金属离子)对色素稳定性基本无影响,Al~(3+)对色素稳定性有不良影响,强氧化剂Na Cl O对其有明显增色效果,在K_2Cr O_7、Na_2Cr O_7、NaCl O、Fe Cl_3、浓H_2SO_4、浓HCl、浓HNO_3、K_2Mn O_4(只含1种氧化剂)中稳定存在。试验所发现的红棕色素稳定性良好,是对产色素菌的进一步丰富,可以为微生物天然色素特别是真菌色素的研究和利用提供一定参考。 相似文献
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【目的】研究奶牛乳腺炎源大肠杆菌中耶尔森菌HPI携带情况及其与O血清型的关系,并对部分菌株的相关基因序列进行分析。【方法】从中国北京、内蒙古、甘肃、四川、重庆、云南、贵州等7个省市部分地区1 260份临床型和隐性奶牛乳腺炎奶样中分离得到190株大肠杆菌,对分离菌株进行耶尔森菌强毒力岛核心区irp2基因、fyuA基因及HPI毒力岛在大肠杆菌染色体中插入位置的鉴定,分析HPI毒力岛的携带情况及其与分离菌株O血清型之间的关系。【结果】190株大肠杆菌分离株中,irp2基因阳性率为26.31%(50/190),fyuA基因阳性率为18.94%(36/190)。50株HPI+分离株中检出asn_tRNA_intB 基因32株,阳性率为64%(32/50)。本试验克隆的irp2基因(273 bp)、fyuA基因(1 071 bp)、asn_tRNA_intB基因(1 512 bp)均与已发表序列高度同源,同源性分别在97.1%、98.2%、97.2%以上,且其HPI毒力岛大多位于大肠杆菌染色体的asn_tRNA位点上。【结论】耶尔森菌HPI在奶牛乳腺炎源大肠杆菌中广泛流行分布,但也存在差异,而不同血清型菌株携带HPI的倾向性可能只与特定的血清型有一定的关系。 相似文献
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基于GIS的河套灌区春小麦适生种植区划 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]通过GIS划分河套灌区小麦不同适宜种植区域。[方法]利用河套灌区2个观测站22年小麦观测资料和相应气象资料,计算了小麦各发育期气温、日照等要素,分析了各发育期适宜和不利条件,并利用气候资料与气象产量建立了回归模型,通过地理信息系统将河套灌区小麦种植进行了适宜分区。[结果]选用小麦气象产量与5个因子(5月下旬平均气温、6月中旬平均最低气温、5月中旬平均最高气温、6月中旬日照时数、6月下旬降水量)推算模型为:Y=-15.045+5.511X1+11.711X2-0.49X3+1.249X4—0.663X5,据此建立的该模型细网格推算模型为:Y=20440.962—206.466X纬-86.429X经-1.082X拔,将上式代入GIS,可将该市小麦种植区依次分为沙区、最适宜种植区、适宜种植区、基本适宜种植区和不适宜种植区5个种植类型区。[结论]该研究为促进河套灌区农业结构调整提供了科学依据。 相似文献
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以紫皮洋葱为原料,对洋葱色素提取工艺进行研究,并对色素稳定性进行了探究。在单因素筛选和色素初始提取条件确定的基础上,以乙醇浓度、超声时间、液料比为影响因子,采用Box-Behnken设计方法,利用3因素3水平正交试验确定了最佳试验条件。结果表明,0.1 g洋葱的洋葱色素最佳提取条件是体积分数为38%的乙醇10 mL,液料比为100∶1,超声时间为35 min。在此条件下,提取的色素含量显著提高。柠檬酸、葡萄糖、食盐及金属离子Al3+对洋葱色素有着增色作用,蔗糖需与洋葱色素反应一段时间后才能表现出增色作用,乳糖、可溶性淀粉、果糖对色素稳定性有一定影响。综合考虑,洋葱天然色素稳定性良好,具有广泛的食品和工业价值。 相似文献
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晋西北河保偏矿区土地利用变化动态分析 总被引:1,自引:1,他引:0
基于LandsatTM/ETM+遥感影像,分析了河保偏矿区在1990~2006年间的土地利用变化规律。结果表明,整个研究期内,土地利用处于快速调整和不稳定的阶段,农田面积持续增加,一方面原有的部分旱地被改造为水田,另一方面大面积的未利用地被开垦为旱地;同时受国家退耕还林工程政策实施的影响,区域内林地面积在评价后期(2000~2006年)明显增加,目前相对丰富的水资源从一定程度上为林地的扩展提供了保障,使得煤矿开采对区域生态环境的负面影响被有效地消除。但是,在区域供水条件持续减弱的背景下,区域农业和生态可持续发展存在着很大的不确定性。从长远的角度上看,采用先进的节水技术,充分发挥该区域的水资源优势,才能保证区域农业及生态环境可持续发展。 相似文献
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采用正交设计法,对植物内生真菌(SW-7)产黄色素发酵条件进行优选。通过液体培养在四种培养基中选择发酵所合适的培养基,以菌丝菌体产量和黄色素产量为因变量,摇床转速、初始pH、发酵温度和发酵时间为自变量,优选发酵条件。结果表明,在4种培养基中选择PDA培养基为石韦内生真菌(SW-7)发酵培养基,以L16(45)正交试验设计选择出适合于(SW-7)产生黄色素物质的基本条件为转速160 r·min-1、pH值5、发酵温度30 ℃、发酵时间10 d。经验证,在该条件下,真菌菌体为7.68 g·L-1,色素吸光度为1.716,菌体生长量和色素产量皆最佳。 相似文献