温郁金RAPD-PCR反应体系建立及条件优化

在提取纯化温郁金DNA的基础上,利用PCR扩增技术,对Mg2 、dNTP、模板DTA、引物、Taq聚合酶等反应条件进行优化,建立温郁金基因组DNA的RAPD-PCR最佳反应体系.结果表明:最佳条件是总体积为25μL,其中Mg2 (25mM)2μL,Taq 聚合酶(5 U/μL)0.3μL,引物浓度(20μM)1.0μL,模板DNA(5 ng/μL)1.0μL,dNTP(2.5 mM)2.0μL,10×PCRbuffer 2.5μL;PCR扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性35 s,36℃退火1min,72℃复性1.5 min,共42个循环;最后72℃延伸10 min,该研究得出的体系是温郁金RAPD-PCR的最适宜反应体系,具有省时、经济、简便以及扩增条带较清晰、稳定等特点,为今后温郁金的遗传多样性研究奠定了基础.     

温郁金愈伤组织培养及快速繁殖

为了提纯复壮温郁金资源,快速繁殖良种苗木,满足市场供不应求的现状,对温郁金外植体培养及愈伤组织的诱导、继代、分化和再生进行研究.结果表明:莪术外植体在以MS培养基为基本培养基,附加6-BA 3.0 mg/L IAA 1.0 mg/L适于丛生芽的诱导与增殖;附加2,4-D 2.0 mg/L KT 5.0 mg/L适于愈伤组织的诱导;附加2,4-D 1.0 mg/L KT 0.5 mg/L适于愈伤组织的继代培养;附加KT 5.0 mg/L NAA 0.3 mg/L适于愈伤组织的分化,生根的最佳培养基为MS IAA 1.0 mg/L.因此,可以通过组织培养的方式提纯复壮温郁金资源,进行温郁金的快速繁殖.