嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)DHHJ分解角蛋白的生化机制初探

对嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)DHHJ降解角蛋白的生化机制进行初步研究。结果发现:该细菌与羽毛共培养24 h后,电镜下观察到细菌紧密地生长在羽枝上,96 h后羽毛完全降解;该菌所产角蛋白酶属于胞外酶,胞内二硫键还原酶可提高该胞外酶活性3倍左右。单独的角蛋白酶和二硫键还原酶在没有活的细菌存在下,都不能完全降解羽毛,这说明细菌附着在降解过程中起了重要的作用,也可能是由于细菌持续提供了一种还原剂破坏二硫键。此外,羽毛降解过程中,在细菌与羽毛共培养液中检测到亚硫酸盐,说明亚硫酸盐解可能对羽毛降解也起了一定的作用。     

一个适合松茸菌丝生长的加富培养基

本研究根据微测量法测量菌丝生长直径及长度指标确定了一个适合松茸(Tricholoma matsutake)菌丝培养的培养基,培养基配方(g/L) :去皮马铃薯(煮出液)100 ,葡萄糖15 ,酵母浸膏3 ,D-异亮氨酸0 .15 ,(NH4)2HPO40 .25 ,KH2PO40 .5 ,CaCl20 .05 ,NaCl 0 .03 ,麦芽糖0 .05 ,MgSO4.7 H2O 0 .5 ,MnSO40 .2 ,维生素B10 .0001 ,琼脂30 ,1 % FeCl31 .2 mL,pH值4 .5     

同源重组整合vgb基因提升枯草芽孢杆菌亚麻脱胶能力

【目的】将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表达,以改善枯草芽孢杆菌的呼吸强度,通过高密度培养提高果胶酶的表达量,最终明显改善脱胶效果。【方法】构建含有vgb基因、amy E基因以及启动子P43的p SK-vgb(+)质粒,通过同源重组的方法,将vgb基因整合到枯草芽孢杆菌A5的染色体上,得到稳定表达透明颤菌血红蛋白的枯草芽孢杆菌A5-vgb(+)。分别采用PCR和CO差光谱分析法检测vgb基因的整合状态与血红蛋白的稳定表达,并通过发酵摇瓶试验研究VHb对菌株果胶酶产量的影响。将构建好的A5-vgb(+)菌株进行脱胶试验,通过XRD结晶度与电镜扫描分析鉴定脱胶效果。【结果】PCR与CO差光谱检测表明,vgb基因成功整合在A5菌株中,且正确表达的VHb具有生物学活性,在150 rpm,37℃,p H=8.0,16小时发酵的条件下,vgb基因的表达促使A5-vgb(+)菌株的果胶酶产量较不含vgb基因的菌株提升了29.5%。XRD与电镜扫描结果表明,构建的A5-vgb(+)菌株的脱胶效果相较于不含vgb的菌株,在结晶度上提高了0.55%,表面更光滑。【结论】将vgb基因整合至枯草芽孢杆菌A5菌株中,可提高A5菌株的脱胶效果。