CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥REVOLUTA基因突变体的鉴定

CRISPR/Cas9系统可对植物的内源基因进行定点编辑,为获得基因缺失突变体提供了新的工具。HD-ZipⅢ家族成员REVOLUTA(REV)是植物发育过程中的关键转录因子。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对拟南芥REV进行特异性定点编辑,构建REV基因编辑表达载体,并利用农杆菌介导的花序浸染法将其转入拟南芥。经潮霉素抗性平板筛选和PCR扩增及测序鉴定,获得7棵转基因株系。对转基因植株REV基因的测序结果显示,有3株均成功在靶点1处产生编辑,且其中1株在靶点2处也成功编辑。该基因编辑突变体的获得为后续深入研究REV基因在拟南芥形态发育过程中的作用提供了新的遗传材料。     

印度南瓜高效再生体系的优化

以10个基因型印度南瓜子叶节为外植体，研究了不同激素浓度配比、外植体处理方式、抑菌抗生素种类和浓度等对印度南瓜离体诱导再生的影响。结果表明：印度南瓜离体培养再生率受外源激素浓度配比和基因型的影响较大，较适宜的激素浓度配比为1.0～2.0 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 ABA。外植体的切取时间、切割方式、接种方式等也是影响再生率的重要因素，播种后24～48 h，切取1/2或1/4子叶节，采用斜插法接种的外植体再生率较高。外源添加100 mg·L-1头孢噻肟钠（Cef）能够有效抑制细菌污染。