The surveillance of plant hygiene in the slaughtering process

Basing on inspections of slaughterhouses it was tried to judge the effectiveness of the hygiene supervision implemented by the legislation. The organization of the control, the technological process including abattoir constructions and operations, the general hygienic aspects with special regard to cleaning and disinfection were registered. It is clearly demonstrated by grave examples (eg. wrong organization, insufficient employment of staff, incomplete knowledge, illegal practices) that nowadays in spite of a few exceptions, the supervision of hygiene in abattoirs is fragmentary. Paying attention to the conceptions of EEC committees dealing already with systematic controls, it would be well done to establish already known systems at once in the plants. According to the meat hygiene regulations exclusively official veterinarians are competent for this field of activities. These have to take the actual scientific knowledge into consideration.     

Yersiniosis in zoo marmosets (Callitrix jacchuss) caused by Yersinia enterocolitica 4/O:3

The aim of this research was to describe two fatal cases of Yersinia enterocolitica bioserotype 4/O:3 infection in non-human primates and to characterise the isolates by PCR and PFGE. In July 2004, two marmosets (Callitrix jacchuss) born in captivity in Zagreb Zoo, died following a few days of intermittent diarrhoea in intervals of 2 weeks. The pathomorphological diagnosis of the female (born in 1997) and the male (born in 1995) marmoset, was disseminated miliary necrosis of the liver. Y. enterocolitica 4/O:3 was isolated from both livers showing that monkeys are susceptible to this bioserotype. The ail gene, which is an essential chromosomal virulence factor in pathogenic Y. enterocolitica isolates, was present in the marmoset isolates. Two different PFGE patterns were obtained from the isolates of the male liver with NotI enzyme. One genotype of the male marmoset isolate was indistinguishable from the genotype of the female marmoset isolate when NotI, ApaI and XhoI enzymes were used indicating a common infection source for the marmosets. The genotypes of the marmoset isolates differed only slightly from one human (of seven Croatian isolates) and from one pig isolate (representing a common genotype found among human and porcine isolates in Germany) suggesting that raw pork fed to the marmoset could have been the infection source.     

Nachweis eines Toxins im Kartoffelknollengewebe nach Inokulation mitPhytophthora infestans (Mont.) de Bary

Zusammenfassung Nach Inokulation von Kartoffelscheiben mitPhytophthora infestans konnte im befallenen Gewebe ein Toxin nachgewiesen werden. Der aus dem Gewebe gewonnene Extrakt hatte die gleiche Wirkung wie das in Flüssigkulturausgeschiedene Toxin: Er l?ste eine nekrotische Reaktion und die Akkumulation von Phytoalexinen im Knollengewebe aus. Die vergleichende chemische Untersuchung des in Flüssigkultur ausgeschiedenen und des im befallenen Knollengewebe enthaltenen Toxins deutet darauf hin, dass es sich um die gleiche Substanz handelt. Dieses Toxin war im Knollengewebe sowohl nach Inokulation mit einem inkompatiblen als auch mit einem kompatiblen Pathotyp vonP. infestans vorhanden. Bei inkompatibler Wechselwirkung wurde es schneller gebildet; nach Ablauf von 3 Tagen konnte keine weitere Toxin-Bildung beobachtet werden. Bei kompatibler Wechselwirkung dagegen nahm sie über diesen Zeitpunkt hinaus entsprechend der Ausbreitung des Pilzes im Gewebe zu. Zwischen der Abwehr des Pilzes durch die Pflanze und der Geschwindigkeit der Toxin-Bildung bestehen offenbar Zusammenh?nge.

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Summary A toxin could be detected in potato tuber tissue after inoculation withPhytophthora infestans. When extracted from infected tissue, it had the same effect as a toxin excreted in liquid culture: it produced a necrotic reaction and the accumulation of phytoalexins in potato tuber tissue (Table 1). The toxin excreted in liquid culture and that extracted from infected tissue were heat-stable macromolecules precipitated by acetone. Their molecular weights, as established by gel chromatography, were about 20 000 and they were negatively charged, having isoelectric points between pH 3 and pH 4 (Table 2). This suggests that the same toxin was involved in both cases. The toxin was present in tissue after inoculation with an incompatible and a compatible pathotype ofP. infestans. It was formed more quickly in the incompatible reaction; the fungus was contained after three days and no further toxin formation was observed. This establishes that the incompatible pathotype was contained within three days. By comparison the toxin increased in the compatible interaction from this time onwards, corresponding to the expansion of the fungus within the tissue (Fig. 1). There is an obvious relationship between the defence response of the plant to the fungus and the speed of toxin formation.

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Résumé Après inoculation de rondelles de pommes de terre avecPhytophthora infestans, une toxine a été décelée dans le tissu contaminé. L'extrait obtenu du tissu contaminé avait le même effet que la toxine libérée par des cultures liquides; il provoquait une réaction nécrotique ainsi que l'accumulation de phytoalexines dans la chair des tubercules de pommes de terre (tabl. 1). Non seulement la toxine libérée par la culture liquide mais également celle du tissu contaminé était résistante à la chaleur. Il s'agit d'une macro-molécule qui se précipite avec de l'acétone, dont le poids moléculaire déterminé par chromatographie sur gel se situait aux environs de 20 000 avec une charge négative, et se laissant focaliser dans le champ électrique entre un pH 3 et un pH 4 (tabl. 2). L'hypothèse qu'il pourrait s'agir dans les deux cas de la même toxine semblait donc probable. La toxine était présente dans le tissu des tubercules aussi bien après inoculation avec un pathotype incompatible qu'avec un pathotype compatible deP. infestans. Lors d'interactions incompatibles, la toxine était formée plus rapidement. Après 3 jours, le champignon était neutralisé et il n'y eut plus d'autre formation de toxine. Cela correspond avec l'observation selon laquelle un pathotype incompatible est neutralisé dans les trois jours. Lors d'interactions compatibles, la formation de toxines s'étend par contre au-delà de cette durée selon la propagation du champignon dans la plante (fig. 1). Il semblerait qu'il y ait correspondance entre la durée de défense que demande la plante et la rapidité de formation de la toxine.

     

Wirkung eines Toxins vonPhytophthora infestans (Mont.) de Bary auf Kartoffelblätter

Zusammenfassung Die Wirkung eines vonPhytophthora infestans in Flüssigkultur ausgeschiedenen Toxins auf Kartoffelbl?tter wurde mit Hilfe von drei Blattests untersucht. Diese unterschieden sich hinsichtlich der Applikationstechnik: Aufsprühen der Toxinl?sung, Injektion, Hineinstellen abgeschnittener Bl?tter in Toxinl?sung. Aufsprühen der Toxinl?sung führte zur Ausbildung einer Vielzahl punktf?rmiger Nekrosen, die denen nach Inokulation mit einem inkompatiblen Pathotyp vonP. infestans glichen. Applikation nach den anderen beiden Methoden führte zu Welke- und Absterbeerscheinungen. Die Ermittlung der Dosis/Wirkung-Beziehung ergab, dass die geringste sch?digende Toxinkonzentration 0,1 war, bezogen auf das Kulturfiltrat (=1). Das Toxin erwies sich als sortenspezifisch. Blattsch?den nach Toxinapplikation traten ausschliesslich beiSolanum tuberosum und nich bei anderen Pflanzenarten auf. Der vergleichende Blatt- und Knollentest der Fraktionen der Gelfiltration liess darauf schliessen, dass die in beiden Tests ermittelte Toxizit?t auf dieselben Substanzen zurückzuführen ist.

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Summary A toxin secreted byP. infestans in liquid culture was purified by ultrafiltration and its effects were examined in leaf tests by spraying, injection and immersion of detached leaves in the toxin solution. Spraying resulted in the development of numerous point-like necroses which resembled inoculation with an incompatible pathotype ofP. infestans. Injection resulted in a yellowing and wilt within three days and eventually, after four or five days, death of the entire leaf. Detached leaves with their petioles immersed in toxin solution also showed yellowing and wilting within three days (Fig. 1), as well as a drastic reduction in leaf fresh weight and chlorophyll content (Fig. 2). The relationship between dose of toxin and leaf damage in the three leaf tests (Table 1) showed that the different numbers of lesions produced by spraying enabled more precise differentiation of damage than the other two tests, and allowed quantification of the toxin over a wider range of concentrations. The weakest concentration causing damage was 0.1, relative to the raw culture filtrate (=1). The toxin could be detected at this concentration in spray and injection tests. When leaves of different cultivars were placed in toxin solution they clearly differed in the intensity and speed of their necrotic reactions, showing that the reaction was cultivar specific (Table 2). There was, however, no obvious correlation in these results between the toxin-induced reaction and resistance toP. infestans, so that the reaction is not yet a test for selecting resistant cultivars. In spray tests the toxin damaged only the leaves ofSolanum tuberosum and not other Solanaceae or representatives of other plant families (Table 3). The damaging effect of the toxin is therefore presumed to be restricted to the speciesSolanum tuberosum. Gel filtration was used to determine whether the materials in culture filtrates toxic to potato leaves, also damaged tuber tissue. Eluted fractions were collected and compared for their toxic effects in leaf and tuber tests. The leaf tests were examined initially for their sensitivity to the ion strength and salt content of the elution buffer. The injection test was least sensitive (Table 4) and was therefore chosen for toxicity testing. The same factions which proved toxic in leaf tests, scored three days after application, also had a damaging effect on tuber tissue (Fig. 3, A and B). There was general agreement between the intensity of leaf damage and tuber damage, but the low toxicity of fractions 13–16 in the tuber test was not detected in the leaf tests. It can be concluded on the basis of the correlation between the results of leaf and tuber tests that the same substance damage leaf and tuber tissues. Carbohydrates, proteins or glycoproteins, toxic atom concentrations, could be involved, as is shown in Fig. 3, C and D.

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Résumé Une toxine sécrétée par une culture hydroponique du champignonPhytophthora infestans a été purifiée par ultrafiltration, puis son action a été étudiée à l'aide de trois tests foliaires. Ces tests se différenciaient par la méthode d'application: pulvérisation de la solution toxique, injection et trempage des feuilles coupées dans la solution toxique. La pulvérisation de la solution avait pour effet la formation d'une multitude de petites nécroses qui ressemblaient beaucoup aux sympt?mes obtenus après inoculation avec un pathotype incompatible deP. infestans. L'injection de la solution toxique provoquait déjà après 3 jours le jaunissement et flétrissement et entra?nait la mort des folioles après 4 à 5 jours. Des feuilles détachées, dont le pétiole a été trempée dans la solution présentaient également après 3 jours un jaunissement et flétrissement (fig. 1), ainsi qu'une perte rapide du poids et de la teneur en chlorophylle (fig. 2). La relation entre la dose toxique et l'effet dommageable sur feilles a été analysée à l'aide des trois tests de feuilles (tabl. 1). En présentant une relation entre le nombre des lésions et la concentration de toxines, le test par pulvérisation a permis une meilleure délimitation quantitative de ces toxines que les deux autres méthodes. La concentratlon de la toxine la plus faible provoquant des lésions était de 0,1 (filtrat de culture non dilué=1). L'effet de la toxine a été obtenu à cette concentration par la pulvérisation et l'injection. Des feuilles de différentes variétés ont été mises dans de la solution toxique. Les variétés examinées se distinguaient nettement quant à l'intensité et la rapidité des réactions (tabl. 2). Il s'agit d'une réaction spécifique des variétés à la toxine. Comme ces résultats n'ont pas encore permis d'obtenir une corrélation entre le taux de nécroses induites par la toxine et la résistance auP. infestans, la réaction du végétal à la toxine ne peut pas encore être utilisée comme test pour la sélection des variétés. La toxine provoquait des dégats uniquement sur feuilles deSolanum tuberosum, mais pas sur les autres solanacées, ni sur des représentants d'espèces d'autres familles comme le montre le test de pulvérisation (tabl. 3). Afin d'étudier si les substances toxiques pour les feuilles de pommes de terre contenues dans le filtrat de culture provoquent également des dégats sur le tissu des tubercules, ou s'il s'agit d'autres substances, il a été procédé à une filtration par gel. L'éluat ayant été fractionné et récupéré, chaque fraction a été testée quant à son effet toxique sur feuilles et tubercules. Il s'agissait de déterminer la sensibilité des feuilles aux ions et à la concentration en sel du tampon de l'éluat. Le test par injection était le moins sensible (tabl. 4) et par conséquent nous l'avons choisi pour les essais de toxicité. L'examen des dégats provoqués par la toxine, 3 jours après l'application, (fig. 3, A et B) a démontré que la fraction toxique pour feuilles l'était également pour les tubercules. L'intensité des dégats sur feuilles correspondait à celle observée sur les tubercules. Pourtant les fractions 13–16 se sont révélées peu toxiques, avec l'aide du test des tubercules, ce que le test foliaire n'avait pas démontré. La bonne corrélation des résultats obtenus entre tests folaires et tests de tubercules permet de conclure que les mêmes substances sont toxiques pour feuilles et tubercules. Il pourrait s'agir d'hydrates de carbone, de protéines ou glycoprotéines qui, à faible concentration, ont un effet toxique (fig. 3, C et D).

     

Neue Methode zur Kultur vonPhytophthora infestans (Mont.) de Bary in Flüssigmedien

Zusammenfassung Im Vergleich zur Beimpfung von Flüssigkulturen des PilzesPhytophthora infestans mit einem Myzelfl?ckchen führt die Beimpfung mit einer Sporangiensuspension zu st?rkerem Myzelwachstum, die zur Beimpfung ben?tigte Sporangienmenge kann exakt bestimmt werden, und die Kultur wird mit nur einem einzigen Entwicklungsstadium des Pilzes gestartet.     

Clostridia in carcasses and fresh meat--a literature review]

Clostridia are of large clinical importance as well as in the field of food hygiene, where they are responsible for spoilage but they also have a certain significance as food poisoning organisms. Information on the ecology of Clostridia in samples of deep muscle tissue of slaughtered animals is insufficient. This article is intended to increase the knowledge on the occurrence of different Clostridia species in slaughtered animals. The main emphasis is put on the significance of clostridia in meat hygiene. The theoretical basis of the so called original content of microorganisms (intrinsic bacteria), the factors and pathways of Clostridia spreading in muscles and organs are demonstrated.     

Wirkung eines Toxins vonPhytophthora infestans (Mont.) de Bary auf Kartoffelknollengewebe

Zusammenfassung Phytophthora infestans, der Erreger der Kraut- und Knollenf?ule der Kartoffel, scheidet in Flüssigkultur ein Toxin aus, dessen Eigenschaften untersucht wurden. Es handelt sich um ein sortenspezifisches Toxin, das die Zellen von Kartoffelknollengewebe innerhalb von drei Tagen zum Absterben bringt. Dieser Vorgang ist durch Verbr?unung der Zellen, Granulierung der Cytoplasma-Einschlüsse sowie Einlagerung von Suberin und Lignin in die Zellw?nde gekennzeichnet. Das Toxin l?sst sich bereits nach dreit?giger Pilzkultur nachweisen. Es ist hitzestabil, unl?slich in organischen L?sungsmitteln und l?sst sich durch Ultrafiltration auf einfache Weise von s?mtlichen Bestandteilen des Kulturmediums abtrennen; sein Molekulargewicht, ermittelt durch Gelchromatographie, liegt bei 20 000. Das Toxin verursacht im Knollengewebe nicht nur nekrotische Reaktion, sondern l?st auch die Akkumulation von Phytoalexinen aus. Diese beiden Vorg?nge sind auch bei der Abwehr des Erregers zu beobachten und stehen urs?chlich im Zusammenhang mit der Resistenz. Das beschriebene Toxin kann daher als Ausl?ser von Resistenzmechanismen der Kartoffelknolle angesehen werden.

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Summary The properties of a toxin produced in liquid culture byPhytophthora infestans, cause of foliage and tuber blight of potato, were studied. Within three days of its application to potato discs, the uppermost three to six layers of cells were dead. This was manifested as a browning of the cells, granulation of the cytoplasmic contents (Fig. 1) and a sharp increase in auto-fluorescence in the cell wall area (Fig. 2) attributable to the deposition of suberin and lignin in the cell wall. The toxin was shown to be heat-stable and insoluble in organic solvents. It was readily separated from nutrient solution by ultrafiltration and its molecular weight, as determined by gel chromatography, was about 20 000. The toxin was a product of active growth in that increasing toxicity was observed in culture filtrates with increasing age until the beginning of the decay phase (Table 1). It was detectable in cultures only three days old suggesting that it may be formed by the fungus during infection of the potato. There were clear differences in the intensity and speed of the necrotic reaction in different potato cultivars after application of the culture filtrate (Table 2). The reaction was therfore cultivar-specific. There has, however, been no correlation to date between this reaction and resistance rating to the disease so that a test for selecting resistant cultivars on the basis of the reaction is not yet feasible. Only fractions with toxic activity, obtained by gel chromatography during toxin purification, triggered the accumulation of the phytoalexins rishitin and lubimin (Fig. 3). Cell death and phytoalexin accumulation cannot therefore be regarded as being independent of each other, but are closely related. The progress of phytoalexin accumulation after application of purified toxin is shown in Fig. 4. The toxin triggered the same phytoalexins in similar amounts and at similar rates as are accumulated during a succesful resistance response to the disease. The dose-response curve (Fig. 5) shows that elicitor activity was still detectable at a 100-fold dilution, relative to raw culture filtrate. The toxic effect could still be detected at a 1000-fold dilution. Comparison of the toxic and elicitor activities at different levels of dilution shows that they are positively correlated. The toxin has been shown to trigger the resistance mechanism causing cell death in potato tubers, suberization and lignification and the accumulation of phytoalexins.

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Résumé Les caractéristiques de la substance toxique libérée en culture liquide par l'agent du mildiou de la pomme de terre (Phytophthora infestans) sont examinées dans ce travail. Sur rondelles de pommes de terre, l'application d'une goutte de cette toxine provoque dans les trois jours la mort de 3–6 couches de cellules superficielles. Ce phénomène s'est manifesté par le brunissement des cellules, la granulation des inclusions cytoplasmiques (fig. 1) et une forte augmentation de l'autofluorescence des parois cellulaires (fig. 2), due à une accumulation de subérine et de lignine dans les parois cellulaires. La toxine s'est révélée stable à la chaleur et insoluble dans les solvants organiques. Par l'ultrafiltration, cette substance a été aisément isolée des autres composants de la solution nutritive. Son poids moléculaire déterminé par la chromatographie sur gel se situe aux environs de 20 000. L'augmentation de la toxicité du filtrat pendant la culture (tabl. 1) mais avant le dépérissement, permet de conclure que la toxine est produite par le champignon vivant. Comme l'effet toxique était déjà visible après 3 jours de culture, l'on peut supposer que le champignon libère également cette substance lors de la contamination du tubercule. Les diverses variétés examinées se sont différenciées par l'intensité et la rapidité de la formation des nécroses après application d'une goutte de filtrat de culture (tabl. 2). La réaction était donc spécifique à la variété. Etant donné qu'il n'a pas été trouvé de corrélation entre cette réaction et des caractères de résistance à cet agent, le testage des nouvelles variétés sur leur éventuelle résistance à cette toxine para?t encore prématuré. Seules les fractions retenues lors de la purification de la toxine obtenue par chromatographie sur gel, ont provoqué l'accumulation des phytoalexines rishitine et lubimine (fig. 3). Cette observation permet de conclure que le dépérissement des cellules est en étroite relation avec l'accumulation de phytoalexines. L'évolution des phytoalexines après application de la toxine purifiée est présentée sur la figure 4. La toxine à comme effet d'accumuler en quantité comparable et avec égale rapidité les phytoalexines identiques à celles qui résultent de la réaction de défense contre le mildiou. De la relation dose-effet (fig. 5), il ressort que l'activité-éliciteur est encore détectable après une dilution de 100 fois, du filtrat naturel. L'effet toxique a même été observé après une dilution de 1000 fois. La comparaison entre la toxicité et l'activité-éliciteur pour les différents niveaux de dilution, montre une corrélation positive entre les deux phénomènes. La toxine s'est avérée de plusieurs manières, comme responsable du déclenchement du mécanisme de résistance, qui se manifeste par la mort de cellules des tissus du tubercule, la cicatrisation et l'accumulation des phytoalexines.