梨酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定

酵母双杂交是检测蛋白质之间相互作用的有效手段。构建梨酵母双杂交cDNA文库，能为利用酵母双杂交技术探究梨基因功能的互作机制提供技术支撑。本研究以沙梨主栽品种‘圆黄’梨的叶片和果肉为材料，采用Trizol法提取其RNA，利用SMART技术经LD-PCR合成全长cDNA，通过同源重组法与pGADT7载体连接，再电转化至大肠杆菌菌株。经检测，构建的cDNA文库滴度为1.76×108 cfu/mL，文库片段插入阳性率为100%，片段长度主要分布在600~1500 bp。该研究结果表明，构建的cDNA文库质量较高，完整性较好，能为后续利用酵母双杂交技术鉴定基因的互作蛋白奠定基础。