水牛卵母细胞孤雌激活方法的优化

为了研究离子霉素(Ion)在不同环境下对水牛孤雌激活效果的影响及水牛卵母细胞在6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)液中以聚集激活或分离激活方式对激活效果的影响。试验对比了水牛卵母细胞在25℃室温环境和38.5℃CO2培养箱环境下的Ion激活效果,还比较了水牛卵母细胞在6-DMAP液中进行聚集激活和分离激活的孤雌激活效果。结果表明:试验组8-细胞胚胎率(54.11%)和囊胚率(31.51%)均高于对照组的8-细胞胚胎率(51.68%)和囊胚率(27.52%),但无统计学差异;在6-DMAP液中分离激活组(1组)的囊胚率明显优于聚集激活组(2组)的囊胚率。     

徒手克隆工具自制及改进

徒手克隆技术(handmade somatic cell cloning,HMC)解决了由于昂贵设备对核移植技术应用的制约问题。通过徒手克隆刀的自制,不但进一步节省了成本,且更能符合使用者的习惯,提高总的切割效率。试验结果表明,利用自制克隆刀进行半卵法去核,可以达到每小时切割496枚卵母细胞的切割速度和88.14%的存活率;自制聚集针具有制作简单,可以打磨、效果好等特点,可以进一步简化和降低徒手克隆技术的成本,提高克隆效率。     

水牛小腔卵泡分离方法的初步研究

本研究比较了不同的分离方法和酶作用的不同时间,以及不同的卵巢表面状态等因素对水牛小腔卵泡分离效果的影响,以期建立有效的水牛小腔卵泡分离体系。结果发现,采用机械与酶结合的方法分离水牛小腔卵泡时,平均每个卵巢获得5.64个小腔卵泡,显著高于机械法分离平均每个卵巢获得的3.12个小腔卵泡数(P＜0.05);当胶原蛋白酶作用12或15 min,每个卵巢平均获得的小腔卵泡数均显著高于5和10 min处理组(P＜0.05),两组之间没有显著差异(P＞0.05),但当消化时间延长到20 min时,卵泡膜被酶消化而破裂,没法分离到小腔卵泡;从表面小于2 mm卵泡且无黄体的卵巢分离获得的小腔卵泡平均数显著高于表面无可见卵泡且有黄体的卵巢组的平均数(7.50和2.25,P＜0.05)。以上结果表明,选用表面无小于2 mm卵泡且无黄体的卵巢,采用机械与酶结合的方法,酶作用时间为12~15 min分离水牛的小腔卵泡,可获得的小腔卵泡数量最多。     

水牛精子提取物对猪卵母细胞的孤雌激活效果

为验证精子蛋白对卵母细胞的激活效果,为提高核移植胚胎的质量提供可行方法,通过比较不同裂解方法提取的水牛精子蛋白,不同浓度提取液显微注入猪卵母细胞,对水牛精子提取物的孤雌激活效果进行研究。结果表明:采用液氮反复冻融法和超声波破碎法预处理后提取的水牛精子提取物对猪体外成熟卵母细胞都有显著的孤雌激活效果。水牛精子蛋白浓度在0.53～5.52 mg/mL,注射剂量为2～4 pL时均可有效激活猪卵母细胞,综合效果以1.77 mg/mL较佳。