人感染H7N9型禽流感疫情综述

禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类传染病,感染人以后会导致人禽流感.人禽流感,是由禽甲型流感病毒某些亚型中的一些毒株引起的急性呼吸道传染病.20世纪以来,人禽流感病毒引发过4次大流行,均发生在人口稠密的地区:1918年暴发的西班牙流感(H1N1),造成近4 000万人死亡;1957年的亚洲流感(H2N2)和1968年的香港流感(H3N2),均造成了近百万人死亡;最近的一次是2009年暴发的猪流感(H1N1),共在208个国家得到确诊,累计1.8万人死亡[1].     

家禽MSTN基因转录子的克隆及真核表达

为了确定家禽中MSTN基因转录子的种类、序列及表达差异,对1日龄海兰鸡、白羽鸡和寿光鸡腿肌MSTN基因进行RT-PCR扩增、TA克隆、测序及SDS-PAGE分析。结果表明,海兰鸡、白羽鸡和寿光鸡鸡腿肌中均存在3种不同大小的MSTN cDNA;cMSTN-1由1 128 bp组成,海兰鸡与白羽鸡的cMSTN的序列相同,寿光鸡在第1 115碱基处由G变为A;cMSTN-2由985 bp组成,缺失了cMSTN-1的374～517 bp处序列;海兰鸡和白羽鸡的cMSTN-2与寿光鸡的cMSTN-2相比,均有5处碱基不同,而海兰鸡和白羽鸡只存在2处碱基不同;cMSTN-2在388～390 bp处出现UAA终止密码子;cMSTN-3由754 bp组成,缺失了374～748处的374个核苷酸,在上述三种家禽中cMSTN-3序列相同。转染成纤维细胞48 h后,pEGFP-N1-cMSTN-2表达蛋白质分子质量约为15 ku,而pEGFP-N1-cMSTN-3不表达。这是首次发现三个品种的鸡体内同时存在三种不同大小的MSTN基因转录子,该结果可为进一步确定MSTN基因的作用机理提供试验依据。     

MSTN RNAi双元表达载体构建及效果试验

为了建立有效抑制MSTN基因表达的方法,本试验利用基因克隆技术构建MSTN RNAi双元表达载体,并利用脂质体介导转染成肌细胞、用SDS-PAGE和Western blottingf法检测蛋白质的表达.试验结果表明,以TA载体为克隆载体,pHANNIBAL为中间载体,可成功构建pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体,将其转染成肌细胞48h后,该双元表达载体可明显抑制成肌细胞MSTN基因的表达.