鸭DCN基因编码区扩增、序列分析及其在大肠杆菌中的表达、蛋白纯化

采用RT-PCR方法从鸭腿肌总RNA中扩增了鸭核心蛋白聚糖基因编码区序列,进行序列分析,并将编码鸭核心蛋白聚糖成熟蛋白的核酸片段连入原核表达载体pET-32a(+)中,加入IPTG诱导其表达后,亲和层析纯化表达的蛋白。采用SDS-PAGE检测,用质谱方法对表达的蛋白进行鉴定。研究成功克隆出鸭核心蛋白聚糖基因编码区序列,序列分析表明,鸭DCN编码区序列由1074个碱基组成,编码357个氨基酸,其中信号肽有16个氨基酸。将鸭DCN蛋白划分为9个结构域(LRR1-9),结合人DCN序列进行序列分析推测结构域中LRR4、5与TGF-β可能存在一定关系。SDS-PAGE检测和质谱鉴定结果表明获得了分子量为54.7ku的鸭DCN融合蛋白。     

鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖和肌纤维发育特点研究

本研究以18、21、24胚龄和27胚龄的鸭胚为实验对象,研究鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖和肌纤维发育的特点。采用BrdU标记鸭胚,用免疫荧光法检测腿肌成肌细胞的增殖情况,同时制作石蜡切片进行H-E染色,照相并观察腿肌肌纤维发育规律。结果表明:鸭胚后期腿肌发育明显,全胚重以47.91%的平均速率增长,而腿肌以78.21%的平均速率增长;4个阶段的肌纤维直径、横切面积和单位面积内肌纤维根数均差异显著(P<0.05),而单位面积细胞核数、BrdU标记率差异不显著(P>0.05),但以21胚龄时BrdU标记率最高。研究结果显示,鸭胚胎后期腿肌成肌细胞增殖速率稳定、不断融入肌纤维,导致肌纤维肥大并快速发育,且21胚龄左右是鸭胚胎期腿肌发育的高峰时期。     

鸭胚卵内注射rhIGF-1对其出壳后卵泡抑素基因表达及胸肌发育的影响

本研究通过卵内注射技术,注射120、100、80和0(对照组)ng.mL-1的重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)到孵化中的鸭胚蛋白中,并检测2日龄雏鸭胸肌发育和卵泡抑素(FST)表达的情况,探讨不同浓度rhIGF-1对FST表达及鸭胸肌发育的影响。结果表明,卵内注射不同浓度的rhIGF-1对雏鸭体质量的影响不显著(P>0.05);但雏鸭胸肌质量、胸肌率随rhIGF-1注射浓度的增加而升高,120 ng.mL-1处理组胸肌质量、胸肌率相对对照组有显著差异(P<0.05);120 ng.mL-1的rhIGF-1处理组肌纤维直径和横切面积最大,显著高于对照组(P<0.05);FST基因在雏鸭胸肌中的表达水平也随rhIGF-1的浓度增大而升高,其中以120 ng.mL-1处理组FST基因表达量最高,显著高于其它各处理组(P<0.05)。结果表明IGF-1对FST的调控作用以浓度依赖的方式进行,高浓度的IGF-1导致FST高表达并促进肌肉发育。     

MYOD基因家族在鸭小肠组织发育中的表达研究

为研究生肌调节因子MYOD家族对鸭小肠发育的影响,利用QRT-PCR法检测了MYOD家族各成员mRNA在鸭胚第10、14、18、22、27天及出生后1周小肠平滑肌发育过程中的相对表达量。结果表明,4个基因在鸭小肠发育过程中均有表达,且各自的表达量呈现一定的规律性变化。其中MYF5在第10天的表达量最高,之后总体呈下降趋势,到第27天时又达到一个高峰;MYOD1在第10天时表达量最高,之后急剧下降;MYOG的表达量从第10天开始曲折上升,到第22天时达到高峰,之后逐步下降;MYF6在第10天时表达量最高,之后急剧下降。初步推测,MYOD基因家族可能参与了小肠的发育或功能的调控。