A:L1 ST128型鸭源多杀性巴氏杆菌的耐药性及毒力分析

旨在阐明贵州某规模化鸭场临床疑似鸭霍乱的病原菌耐药性及毒力特征，通过细菌的分离鉴定、多位点序列分型（MLST）、ERIC-PCR同源性分析、药敏试验、动物回归试验、细菌全基因组测序以及基因组局部比较分析对分离株进行系统研究。结果显示，分离得到5株鸭源多杀性巴氏杆菌（PmCW1~5），均为A：L1 ST128型且同源性较高；分离株均对氨苄西林、阿莫西林、左氧氟沙星和林可霉素4种药物耐药，其中PmCW1还对环丙沙星低水平耐药；对强毒株PmCW1的全基因组数据分析显示，PmCW1中存在β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和多肽类等耐药基因，同时存在多药外排泵及多药耐药蛋白基因，耐药表型与耐药基因检测结果基本相符；PmCW1中存在的毒力基因总数为201个，主要是脂寡糖/脂多糖（LOS/LPS）、荚膜、黏附因子等编码基因；此外，还检测到IV型菌毛基因（ptfA、comE、hofB、hofC、vfr）、铁摄取相关蛋白基因（ccmABCEF、hgbBC、fur、hscB等）以及部分外膜蛋白基因（ompP5等）等；PmCW1具有典型的A：L1型多杀性巴氏杆菌的特征。综上表明，本研究分离得到的ST128型鸭源多杀性巴氏杆菌目前鲜有报道，对其耐药性及毒力的研究可为鸭霍乱的临床用药及疫苗研发提供理论依据。     

鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A原核表达及间接ELISA方法的建立和初步应用

本试验为建立鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer, RA）间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,以RA贵州分离株RAG06基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌OmpA基因,构建pET32a-OmpA重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,重组菌经诱导、超声、纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定获得OmpA重组蛋白大小约57 KD;以OmpA重组蛋白为包被抗原初步建立ELISA方法并优化,经多次方阵检测结果显示,OmpA蛋白以2.243 mg/mL的浓度进行包被,血清以1:100稀释,抗原包被条件为4℃过夜、封闭条件为37℃ 120min、血清反应时间为37℃60min、酶标抗体工作浓度为1:1000、酶标抗体反应时间为37℃ 60min、显色时间为15min为最佳条件。确定临界值为0.389。特异性试验表明RA阳性血清有较好反应外,其他血清均无明显反应。批内变异系数2.77%-8.00%,批间变异系数为1.10%-7.80%。当阳性血清稀释比例为1:1600时,仍可判断为阳性,敏感性较高。应用该方法检测贵州省120份鸭血清、65份鹅血清证明该方法能用于水禽源鸭疫里默氏杆菌的检测,应用该方法检测灭活疫苗免疫后的鸭血清和卵黄抗体,结果表明符合灭活疫苗消长规律。本试验建立的ELISA方法,为RA的流行病学调查和RA抗体监测提供了血清学诊断方法。     

水产技术推广资源配置效率及其区域差异分析

渔业在我国国民经济中占有重要地位和作用,水产技术推广体系是保证我国渔业持续健康发展的基础。本文采用数据包络分析(data envelopment analysis,DEA)中的BCC模型分析2013—2015年全国各地区的水产技术推广资源配置效率,以探究我国各地区水产技术推广资源配置效率的差异。结果表明,我国水产技术推广资源整体配置效率不高,区域间的配置效率差异明显,中南地区水产技术推广资源配置综合效率、纯技术效率和规模效率都高于全国平均水平,东北地区低于全国平均水平。建议通过增加水产技术推广资源总量、因地制宜的配置水产技术推广资源、建立水产技术推广体系联合协作工作机制等方法来提高水产资源配置效率。     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

鸭坦布苏病毒贵州株分离鉴定及其E基因生物信息学分析

从贵州三穗县某鸭场的病鸭病料中分离出1株坦布苏病毒(tembusu virus, TMUV),经鉴定将其命名为TMUV-GZ。为了解该分离株的生物学特性及其E基因的分子特点,测定TMUV-GZ株的半数胚致死量(ELD₅₀),将病毒接种至不同宿主细胞,观察其适应性与增殖能力;对E基因克隆测序并进行序列分析,对其编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明：TMUV-GZ株能导致鸡胚和鸭胚死亡,该分离株无血凝性,在鸭胚上的ELD₅₀为10^-2.63·(0.2 mL)^-1;该分离株能在Vero细胞、BHK-21细胞和DF-1细胞上增殖,对BHK-21细胞适应性最好。该分离株的E基因与泰国分离株DK/TH/CU-99核苷酸同源性最高,为98.3%;一级结构预测E蛋白的理论等电点为5.01,不稳定系数为39.5,为稳定蛋白质;二级结构预测该蛋白质以α-螺旋、β-折叠、β-转角较多,为亲水性蛋白质,可能存在10个优势抗原表位、2个跨膜区、3个结构域,无信号肽;三级结构预测该蛋白质模型结构与其他黄病毒E蛋白实验结构之...