科技入户新天地 淡妆浓抹总相宜——合浦县2006年渔业科技入户活动印象

火红的6月，笔者随合浦县专家组到当地山口和闸口两个镇渔业科技示范点的虾塘地头转了一圈，感受了这些普通农民和基层科技人员身上产生的明显变化。如果说，2005年合浦县作为广西唯一的渔业科技入户示范县受到农业部表彰，彰显的是那看得见的面上工作和效益，那么，在合浦农村广大农民经过1年多时间的渔业科技入户活动，     

斑马鱼zgc113227多克隆抗体及卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体的制备

【目的】制备斑马鱼zgc113227多克隆抗体和卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体,为后续深入研究斑马鱼zgc113227基因和卵形鲳鲹EVM0008813基因的功能特性提供重要工具。【方法】以卵形鲳鲹EVM0008813基因为查询序列,通过BLASTp搜索获得斑马鱼同源基因zgc113227 （NP_001014341）,以同源重组方式构建原核表达载体并转化大肠杆菌B21感受态细胞进行诱导表达,再以诱导表达获得的融合蛋白为抗原免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,然后通过Western blotting鉴定及SDS-PAGE检测zgc113227多克隆抗体特异性,并以高效液相色谱—质谱联用（HPLC-MS）纯化鉴定EVM0008813多肽抗体。【结果】斑马鱼zgc113227和卵形鲳鲹EVM0008813均属于亲水性蛋白,二者的氨基酸序列相似性达58.12%,同时表现为潜在抗原位点多、柔性较强、表面可及性高,且无跨膜结构和信号肽存在。斑马鱼zgc113227和卵形鲳鲹EVM000881的保守结构域均包含5个保守基序（Motif 1~Motif 5）,且发现1个相同的保守结构域（DDE_Tnp_4）,故推测二者均属于DDE_Tnp_4家族。以zgc113227蛋白与等容积弗氏完全佐剂混合为抗原制备获得的zgc113227多克隆抗体效价为1:256000,特异性良好,可通过Protein G亲和层析柱进行纯化;以EVM0008813多肽与牛血清白蛋白（BSA）偶联为抗原制备获得的EVM0008813多肽抗体效价为1:256000,经HPLC-MS纯化鉴定抗体纯度达95.35%,特性良好。【结论】制备获得的斑马鱼zgc113227多克隆抗体和卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体纯度高、抗体效价高、特异性良好,可为斑马鱼zgc113227基因和卵形鲳鲹EVM0008813基因功能研究提供有利工具。     

Ca2+与Mg2+浓度对凡纳滨对虾糠虾幼体育成仔虾成活率和生长的影响

采用浓缩海水与自来水调配的基础海水，以凡纳滨对虾Ⅲ期糠虾幼体（M3）作为试验对象，在小范围（0-100mg／L）内调节育苗用水中Ca^2＋、Mg^2＋浓度，以L9（3^4）正交表设计，研究育苗用水中不同Ca^2＋、Mg^2＋浓度对凡纳滨对虾M3育成仔虾（P10）的成活率和生长的影响。结果表明，在相同饲养条件下，Ca^2＋浓度为494mg／L时，增重效果显著（P〈0．05）；Mg^2＋浓度为1185mg／L的增重效果显著优于1135mg／L水平；Ca^2＋浓度为444mg／L和494mg／L时，对提高M3育成P1和P10的成活效果均具有显著作用（P〈0．01）；Mg^2＋浓度为1185mg／L、Ca^2＋浓度为494mg／L（镁钙比值R=2．40）的交互作用对提高M3育成P10的成活效果最佳（P〈O．01）；Ca^2＋浓度分别为444、494mg／L时，其R值可适范围分别为2．67—2．78和2．30-2．50。同时育苗水体中Ca^2＋与Mg^2＋浓度及Mg^2＋／Ca^2＋均应达到合适的值，方能满足凡纳滨对虾幼体生长发育的需要。在试验浓度梯度范围内，Ca2’是影响凡纳滨对虾增重和成活的主要因子，但对增长无显著影响（P〉0．05），其可适范围为444-494mg／L；Mg^2＋对凡纳滨对虾生长的影响均不显著；Ca^2＋与Mg^2＋浓度的交互作用显著影响M3育成P10的成活率。     

《南美白对虾淡水高产养殖技术开发》项目通过技术鉴定

由广西科学技术厅下达的,广西水产研究所、广西柳州市科学技术局、苍梧县科学技术局、隆安县科学技术局和桂林市水产研究所共同承担的《南美白对虾淡水高产养殖技术开发》项目于2003年3月5日在广西南宁通过专家鉴定。 该项目组示范养殖面积共670.6亩,放养虾苗2,798.6万尾,平均亩放虾苗4.2万尾;成虾总产量196,663.0kg,     

养殖文蛤病害研究进展及前景展望

文蛤是重要的海洋经济贝类,随着人工养殖的发展,暴发性死亡病害频繁发生,造成重大的经济损失.文章通过归纳总结分析,对养殖文蛤病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫性疾病等主要病害的病原体与致病症状、流行规律、组织病理学、检测与诊断、预防和治疗方法等进行综合评述,并展望其研究应用前景.     

碱度调节对南美白对虾室内高密度养殖

【目的】研究碱度调节对南美白对虾养殖水质和生长性状的影响,为零换水有氧异氧养殖系统（ZEAH）适宜碱度的选择提供参考。【方法】采用ZEAH养殖理念,通过泼洒碳酸氢钠（NaHCO3）将12个南美白对虾室内高密度养殖池的碱度分别控制在：T1碱度130 mg/L CaCO3;T2碱度100 mg/L CaCO3;T3碱度70 mg/L CaCO3;T4不调节碱度,每处理设3个重复。在63 d的养殖周期内,定期测量养殖水体理化参数和对虾生长性状参数。【结果】T1和T2处理的养殖水体主要理化参数显著优于T3和T4处理（P＜0.05）,但T1和T2处理间差异不显著（P＞0.05）;各处理的氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐、磷酸盐、悬浮物和溶解CO2均随养殖时间的增加不断上升,但高碱度处理上升速率较慢。除成活率和饵料转化率外,T1和T2处理的对虾生长性状参数也显著优于T3和T4处理（P＜0.05）。从维持碱度水平来看,也是以T1（碱度调节间隔时间6~9 d）和T2（碱度调节间隔时间9~12 d）处理的效果较优。【结论】在高密度养殖系统中,使用碱性化合物增加碱度及提高水体缓冲能力是十分有必要的。综合考虑养殖成本和生态效益,以养殖水体碱度维持在100 mg/L CaCO3为宜。     

抑制性消减杂交技术在对虾基因克隆中的应用

抑制性消减杂交技术是一项筛选、分离未知差异表达基因的试验方法,该技术具有快速、简便、灵敏、特异、高效,所需起始样本量较少等优点。利用该技术构建对虾组织消减cDNA文库,鉴定差异表达相关基因及其表达特性。通过对对虾差异性表达的免疫相关基因、抗病基因及其他性状基因的了解,旨在为进一步研究对虾抗病机理奠定基础,为利用抗病基因进行抗病育种提供一个有效途径,为提高对虾的经济效益提供前景。     

西津水库米埠坑网箱养殖区富营养化状况分析

于2006年10月至2008年7月对西津水库米埠坑网箱养殖区浮游植物进行两个年度共8次调查。第一年度发现浮游植物6门53属,浮游植物年平均数量为35．18×10^4ind·L^-1,生物量为1．07mg·L^-1。第二年度采集到浮游植物6门47属,年平均数量为19．77×10^4ind·L^-1,生物量为1．22mg·L^-1。各站住的数量和生物量显示米埠坑网箱养殖区处于贫营养向中营养转化阶段。而Shannon—Veaner指数表明：第一年度春季2#、3#站位处于富营养化水平,其他均为中营养化水平。结合综合营养指数进行评价,证明米埠坑网箱养殖区处于中营养水平,有向富营养化过渡的趋势,必须及时采取防治措施。     

凡纳滨对虾内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ的克隆及表达分析

以生长性状为指标分离凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,进行斑点杂交筛选获得内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ基因,克隆获得cDNA全长编码序列及部分非编码序列。序列包含270 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为89个氨基酸,预测的相对分子质量为10 300,理论等电点为10.58。通过荧光定量PCR的方法研究了Sec61γ基因在对虾不同组织和不同生长期肌肉组织中的表达情况,结果表明：Sec61γ基因在对虾的血液以及心脏、肝胰腺、肌肉、胃、肠、眼柄等器官或组织中都有表达,其中在肌肉组织中表达量最高,在肠中表达量最低;在对虾不同生长期肌肉中的表达量各不相同,在10日龄的对虾肌肉组织中表达量最高,为45日龄的对虾肌肉组织中表达量的27.6倍。     

对虾WSSV病毒VP281基因的siRNA筛选研究

构建一个对虾WSSV VP281基因的siRNA筛选体系,获取有效siRNA,为进一步开展siRNA抗WSSV研究建立基础.根据已报道的VP281基因编码序列,设计并合成一对引物,扩增出带双酶切位点的VP2 81.对VP281和质粒pEGFP-C1分别酶切后进行连接,获取表达载体pEGFP-VP281.利用专业软件设计3对靶向VP281的siRNA(VP281 -siRNA1、VP281-siRNA2、VP281 -siRNA3),并合成siRNA,将3种siRNA分别与pEGFP-VP281共转染PK细胞.采用Western blot方法检测GFP-VP281融合蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检验siRNA抑制VP2 81基因转录的效果.结果显示,pEGFP -VP281可在BHK细胞正常表达融合蛋白GFP-VP281.3对siRNA对GFP-VP281的mRNA转录均有不同程度的干扰效果,siRNA2的干扰效果最为显著.构建针对WSSV-VP281基因的siRNA筛选体系,初步验证了该系统的有效性,为开展siRNA抗WSSV研究建立了基础.