家蚕杂交分离系的AFLP分析初探

以日系家蚕品种"湘晖"和"872"为亲本进行杂交,从 F2代分别向茧丝量高(A)、中(B)、低(C)3个方向进行定向选择.经过F2～F6共5代的同蛾区交配和选择,获得了茧丝量性状有显著差异的A,B,C共3个家系.以中系蚕品种芙蓉、菁松及其杂交后代为参照群体,对3个杂交分离系进行AFLP分析,获得了617个AFLP分子标记.结果显示:选择到F4代时,A,B,C各杂交分离系的AFLP分子标记表现出一定的差异,到F6代时,A,B,C各杂交分离系间的分子标记差异十分显著且稳定.利用UPGMA法进行聚类分析的结果也显示有很强的规律性,所有个体均按家系有规律地聚在一起.从分子水平证明家蚕同蛾区杂交后代系统选择到F6代即可获得遗传性稳定的不同杂交分离系.     

复合木霉制剂防治黄连根腐病及其机理研究

为评价复合木霉制剂对黄连根腐病的防治效果, 并揭示其防病机理, 为黄连根腐病专用微生物农药的研发奠定基础, 本试验将深绿木霉Trichoderma atroviride、长枝木霉T. longibrachiatum、钩状木霉T. hamatum、拟康宁木霉T. koningiopsis等4种木霉配制的复合制剂和尖镰孢Fusarium oxysporum以不同的方式分别施用于黄连, 统计根腐病发生情况, 检测黄连根部防御酶活性, 用高通量测序分析根际土壤真菌群落结构。结果表明, 复合木霉制剂对尖镰孢导致的根腐病具有明显预防效果;复合木霉制剂和尖镰孢分别接种黄连可提高SOD、POD、CAT、PAL、PPO等防御性酶活性, 产生诱导抗性;而它们先后接种黄连可产生强化效应, 从另一个途径提高植株抗病性。复合木霉制剂和尖镰孢都会降低真菌的数量、多样性, 和某些真菌的相对丰度, 而复合木霉制剂的抑菌作用更强烈, 尤其能明显抑制尖镰孢、Ilyonectria sp.等病原真菌的生长, 且能改善土壤真菌群落结构。木霉和尖镰孢都能在土壤中较长期定殖。可见, 复合木霉制剂可以预防尖镰孢导致的黄连根腐病, 防病机理包括诱导黄连植株产生抗性, 接种后再遭受病原菌侵染产生的强化效应, 优化土壤真菌群落结构, 抑制土壤中病原菌等, 且有效期较长。因此复合木霉制剂具有开发为微生物农药防治黄连根腐病的潜力。     

家蚕AFLP分子标记分离规律的研究

为研究家蚕遗传的多样性,以家蚕品种湘晖×872杂交的91个F_2个体为材料,采用AFLP分子标记技术,对杂交后代的分离规律进行了研究。结果显示:采用的44对引物共扩增出5134条带,其中1002条带呈多态性;经x~2检测,有537条带符合3:1分离比。     

影响家蚕AFLP-银染法的因素及其对策

AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)是一种新型的、有效的分子标记技术，近年来它与银染技术的结合进一步提高了它的实用性。作根据长期的实验经验和教训，对影响AFLP-银染技术的一些因素如DNA的质量、酶切的效果、引物和接头的设计等进行了分析，初步总结出AFLP-银染技术关键之处在于模板DNA的准备和酶切以及引物的选择。PCR扩增、电泳和银染检测对图谱的清晰度和分辨率也有很大的影响。并针对这些因素进行了相应对策的初步探讨。     

青蒿种质资源遗传多样性的SRAP分析

以45份青蒿种质为试材,将分子标记SRAP(sequence-related amplified polymorphism)应用于青蒿种质资源的遗传多样性研究.利用TREECONW软件分析遗传相似系数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.结果表明:30对引物组合共得到382条扩增条带,其中有312条呈现多态性,占81.7%,从DNA分子水平显示出供试种质遗传多样性较为丰富.遗传相似系数变化范围0.683 6～0.857 1.聚类分析表明,青蒿种质亲缘关系与来源地无明显相关性,仅在小分支中表现出一定的地域相关性.     

温度对AFLP银染检测的影响

在家蚕AFLP分子标记多样性的研究中发现温度对AFLP—银染的结果有一定的影响。本实验以湘晖与872杂交的91个F2个体为材料，对AFLP银染过程中温度的影响进行了分析。温度试验结果显示：在25℃左右进行胶板的前期处理和凝胶的制备为最佳温度。     

川续断种子吸水特性及萌发特性研究

目的:研究川续断种子的吸水萌芽特性,为川续断规范化种植提供理论依据和技术参考。方法:种子吸水的研究采用重量法,种子发芽条件研究根据常规发芽试验进行。结果:川续断种子入水后前6h为种子快速吸水阶段,吸水量占最大吸水量的87.2%,20h内吸水饱和,其吸水量为种子平均重量的97.3%左右;川续断种子发芽的适宜温度为20～25℃,最适温度为20℃。发芽初次计数时间为置床后第5天,末次计数时间为置床后第15天,发芽势统计时间为第8天。结论:川续断具有快速吸水的生物学特性;温度对川续断种子的发芽率、发芽势,发芽指数有显著影响,光照有利于种子发芽。     

家蚕F2代不同群体大小的作图效果分析

分别以群体大小 91、81、71、6 1、5 1和 4 5个个体为材料 ,分析了不同群体的作图效果 :相同参数条件下 ,随着群体的减小 ,分群数、不连锁标记数都表现出逐步减少的趋势 ;同一群体随着交换值的逐步减小 ,分群数、不连锁标记数和二联体数逐步增多 ,总图距和平均图距也相应变小 ;相同群体不同标记数在相同的作图参数条件下 ,随着标记数的减少 ,分群数有减少的趋势 ,但较多的标记群体其二联体数为最少 ,而进入连锁群的标记数和总图距有明显的降低趋势。根据Mapmaker分析对参数的设定要求和所研究的分群作图效果以 91个个体为最佳 ,认为家蚕F2 代作图群体至少不应小于 81个个体。     

仙茅属植物SRAP-PCR反应体系的优化

通过单因子和双因子实验对仙茅属植物SRAP-PCR反应体系中主要成分(Mg2 、dNTP、引物、模板和Taq DNA聚合酶)进行优化,并比较了琼脂糖凝胶电泳与非变性PAGE电泳的检测效果.建立了适合仙茅属植物SRAP分析的反应体系:25 μL体系中内含1×PCR buffer、2.0 mmol/L Mg2 、250 μmol/L dNTP、0.2 μmol/L引物、40 ng模板、1 U Taq酶.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率较高且带型清晰,能更准确反映仙茅属植物间的差异.优化的反应体系可以用于仙茅属植物的SRAP分析.     

家蚕杂交分离系的AFLP分析初探

以日系家蚕品种“湘晖”和“872”为亲本进行杂交,从F2代分别向茧丝量高(A)、中(B)、低(C)3个方向进行定向选择。经过F2～F6共5代的同蛾区交配和选择,获得了茧丝量性状有显著差异的A,B,C共3个家系。以中系蚕品种芙蓉、菁松及其杂交后代为参照群体,对3个杂交分离系进行AFIP分析,获得了617个AFIP分子标记。结果显示：选择到F4代时,A,B,C各杂交分离系的AFIP分子标记表现出一定的差异,到F6代时,A,B,C各杂交分离系间的分子标记差异十分显著且稳定。利用UPGMA法进行聚类分析的结果也显示有很强的规律性,所有个体均按家系有规律地聚在一起。从分子水平证明家蚕同蛾区杂交后代系统选择到F6代即可获得遗传性稳定的不同杂交分离系。