秀丽隐杆线虫去饱合酶FAT1基因密码子优化及真核表达载体构建

ω-3长链多不饱和脂肪酸对人体的营养和健康具有重要意义,一旦缺乏将会引起人类各种疾病。去饱和酶FAT1基因是在线虫中合成ω-3长链多不饱和脂肪酸最关键的基因。为了对FAT1基因的密码子进行优化,并构建一个真核表达载体,利用JCat软件对FAT1基因进行了密码子优化,得到一个优化后的基因FAT1m。设计突变引物,利用重叠PCR法拼接全长FAT1m基因,并连接到pBudCE载体中。结果表明:FAT1m基因的16个密码子被改造,包括Val 2个,Ser 2个,Gln 8个,Leu 4个,但是并没有改变氨基酸序列。并且把FAT1m基因连接到pBudCE载体,成功构建了真核表达载体pBud-FAT1m。     

牛乳铁蛋白ELISA检测方法的研究

本文建立了一种ELISA检测牛乳铁蛋白的方法。主要摸索了ELISA的工作条件,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度和一抗稀释浓度,进而确定了二抗工作浓度,通过重复性试验和交叉性试验验证了该法的重现性和特异性。结果表明一抗工作浓度为1∶200000稀释,二抗工作浓度为1∶100000稀释,在此条件下检测牛乳铁蛋白的限度为1.56～100ng/mL,在此范围内,牛乳铁蛋白浓度与OD值之间呈指数相关,其回归方程为y=1.2770×(1.0145-e-0.0338x)(R2=0.9992)。本研究为研制牛乳铁蛋白检测试剂盒奠定了基础。     

人乳中乳铁蛋白ELISA检测方法的研究

建立了一种ELISA检测人乳铁蛋白的方法.主要摸索了ELISA的工作条件,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度和一抗稀释浓度,进而确定了二抗工作浓度,一抗以200 000倍稀释,二抗以100 000倍稀释,工作条件限制范围为1.56～100 ng/mL,用指数曲线拟合计算,所得回归方程为=1.2770×(1.0415-e-0.0388x)(R2=0.9992).通过重复性试验和交叉性试验验证了该法的重现性和特异性.本研究为研制人乳铁蛋白检测试剂盒奠定了基础.