山东规模化养殖场毛皮动物多重感染病原学分析

2012—2013年间,山东10个地市多家毛皮动物养殖场养殖的毛皮动物（狐狸、貉子、水貂）出现腹泻,皮肤湿疹,神经症状,空怀、流产、出血性肺炎等症状和病变类似的疫情,为探明其病因,本研究对发病规模化毛皮动物养殖场发病情况进行调查,并对送检的病料进行病原学检查,结果发现,犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒感染率分别为54.21%、47.30%、31.35%;肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、加德纳菌的感染率分别为37.58%、25.05%、21.81%、14.04%、12.53%、10.37%、8.21%;犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌6种病原的单独感染、二重感染、三重感染、四重感染分别为22.03%、39.52%、36.07%、2.38%,未见五重以上的感染。结果表明,近两年造成山东规模化场毛皮动物发病主要原因是由犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒与肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌多重感染所致,这为规模化毛皮动物养殖场有效地控制疫病提供了理论依据。     

毛皮动物肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛A基因克隆测序与生物信息分析

根据GenBank中肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因A(MrkA)JF759921的序列设计1对引物,对8株毛皮动物肺炎克雷伯菌进行克隆测序,并应用生物信息学相关软件和方法,预测MrkA蛋白二级结构和B细胞抗原表位。PCR扩增出了609bp的目的基因片段,生物信息分析结果显示其开放阅读框架为609bp,编码202个氨基酸;二级结构以无规卷曲为主,有少量的α-螺旋和β-片层,少见β-转角,推测MrkA蛋白有8个B细胞优势抗原表位区域。结果表明,MrkA基因较稳定,其在进化过程中并未发生明显变异,为进一步分析肺炎克雷伯菌免疫机理、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定理论基础。     

水貂主要病原的分子生物学鉴定及多重感染的病原分析

对2012年8月至2013年12月接诊的山东地区的241份病死貂进行病原学鉴定,主要包括生物学特性分析和16S rRNA序列或特定序列的同源性分析,并对多重感染进行统计分析。结果表明,山东地区引起水貂发病的主要病原有:犬瘟热病毒(25.3%)、细小病毒(25.3%)、阿留申病毒(19.1%)、绿脓杆菌(49.0%)、克雷伯氏菌(19.9%)、大肠杆菌(11.2%)、奇异变形杆菌(8.3%)以及巴氏杆菌(5.0%)和肺炎双球菌(2.5%)等。而且主要以单独感染(46.0%)和二重感染(44.4%)为主,三重感染(7.9%)次之,四重感染(1.24%)和五重感染(0.41%)较少。通过本研究掌握了山东地区水貂多重感染的主要病原及其特性,摸清了其感染发病规律,为山东地区规模化养貂场多重感染的诊断与防制提供理论依据。     

山东地区羊绿脓杆菌的分离鉴定及系统发育分析

近年,山东省规模化羊场羊患慢性化脓性肺炎病例频繁出现,为了探明其病原及特点,本试验在流行病学调查基础上,对山东省6个地区10个规模化羊场的病、死羊进行临床症状观察、病理学检查,对所分离的菌株进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16SrRNA基因的分子鉴定。结果显示,从剖检病死羊的肺、肝、气管等组织中分离出6株细菌(分别命名为PA1~PA6),分离菌株镜检均为革兰阴性、短杆菌,对庆大霉素高度敏感,对小鼠具有较强致病作用。综合流行病学和生化试验结果等判定,该6株分离菌均为绿脓杆菌。对6株绿脓杆菌16SrRNA序列分析表明,该6株分离菌与已知的绿脓杆菌16SrRNA序列的同源性为99.9%~100%,与报道的绿脓杆菌菌株B136-33、YMD-4以及LCQ-4的序列位于一个分支上,属于一个亚群,其中与北京株B136-33的进化关系更近,核苷酸同源性为100%。