高效电转化技术在噬菌体抗体库构建中的应用

大肠杆菌的高效电转化技术是构建大容量噬菌体抗体库的关键技术，为了制备高转化效率的大肠杆菌TGI感受态细胞，采用电转化方法探索该菌在对数生长期的不同生长阶段、细胞浓度、噬菌粒DNA含量、电场强度对电转化效率的影响。实验结果表明，在菌株处于对数生长期的0D600值为0．5时，收集细胞制备感受态，感受态细胞浓度为4．0×10m细胞／mL，噬菌粒pCANTAB—ScFvAFBI浓度为100pg/μL，电场强度为20kV／cm，此时制备的大肠杆菌TGI感受态细胞的电转化效率可达2．13×10，cfu／μg DNA。研究结果表明，利用本实验确定的参数，可以制备出大肠杆菌TGI高效电转化感受态细胞，为大容量噬菌体抗体库的构建奠定了坚实的基础。     

同时检测AFB_1和ZEA免疫层析试纸条的研制

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,将其与抗AFB1和ZEA单克隆抗体进行偶联,并把偶联物、AFB1-STI、ZEA-OVA以及硝酸纤维素膜(NC膜)等组装成免疫层析试纸条,同时进行检测条件的最优化设计。胶体金偶联AFB1和ZEA抗体最适pH同为7.0,最适抗体浓度分别为5.0和2.5μg.mL-1,NC膜上包被AFB1-STI和ZEA-OVA的浓度分别1.0和2.0mg.mL-1,为该方法可同时定性检测样品中AFB1和ZEA,其最低检测限分别达到5μg.kg-1和50μg.kg-1;与黄曲霉毒素M1、脱氧血腐镰刀菌烯醇的交叉反应率小于1%。该试纸条具有可同时检测两种真菌毒素的特点,适用于同一样品中多种毒素的快速检测。     

西兰花蔬菜饮料的研制

以西兰花为主要原料,对西兰花饮料的护色方法、配方及稳定性进行了研究。试验结果表明,使用Cu(AC)2对西兰花进行漂烫处理,护色效果最好;通过正交试验确定出该饮品最佳配方为:西兰花200g的榨取原汁、水200mL、蔗糖25g、柠檬酸2mL(10%)、盐2.5mL(10%);另外选择CMC作为稳定剂,饮料的稳定性最佳。     

黄曲霉毒素M1检测ELISA条件的优化及应用研究

采用黄曲霉毒素M1与牛血清白蛋白偶联物抗原免疫Balb/C小鼠获得特异性抗体。利用此抗体,进行间接竞争ELISA法试验,确定了最佳抗原包被反应浓度为1.0μg·mL^-1,最佳抗原包被条件为4℃过夜,一抗和酶标二抗IgG-HRP最佳工作浓度为1∶8000和1∶5000。建立间接竞争定量ELISA方法,该方法的最低检出限是0.08ng·mL^-1,间接竞争ELISA50%抑制率浓度为0.62ng·mL^-1,校正曲线的线性范围为0.04～5ng·mL^-1。在此优化条件下制备的抗体检测黄曲霉毒素M1具有很高的特异性和灵敏性,具有实际应用价值。     

噬菌体展示技术在食品真菌毒素检测领域的应用

噬菌体展示技术（Phage display technology）是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。利用噬菌体表面展示技术可以构建抗体库、随机肽库、蛋白质突变体库和cDNA文库,从而广泛用于单链抗体的筛选、先导化合物的筛选、疫苗的研制等,尤其是在单链抗体、模拟抗原表位的筛选及建立食品安全快速检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文跟踪了目前噬菌体展示技术在真菌毒素检测领域的最新研究进展和发展前景。     

噬菌体展示技术在食品真菌毒素检测领域的应用

噬菌体展示技术（Phage display technology）是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。利用噬菌体表面展示技术可以构建抗体库、随机肽库、蛋白质突变体库和cDNA文库,从而广泛用于单链抗体的筛选、先导化合物的筛选、疫苗的研制等,尤其是在单链抗体、模拟抗原表位的筛选及建立食品安全快速检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文跟踪了目前噬菌体展示技术在真菌毒素检测领域的最新研究进展和发展前景。     

噬菌体展示技术在动物病毒研究中的应用

噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。利用噬菌体表面展示技术可以构建抗体库、随机肤库、蛋白质突变体库和cDNA文库,从而广泛用于抗原表位、抗体、配体、细胞内信号转导以及药物筛选等研究,具有广阔的应用前景。本文跟踪了目前噬菌体展示技术在动物病毒检测领域的最新研究进展和发展前景。     

黄曲霉毒素B1检测ELISA条件的优化

采用黄曲霉毒素B1与牛血清白蛋白偶联物(AFB1—BSA)抗原免疫Balb/C小鼠获得特异性抗体。以AFB1—STI为检测抗原,利用此抗体,进行间接竞争ELISA法试验。通过正交实验确定了最佳抗原包被反应质量浓度为1.0μg/mL;最佳抗原包被条件为:4℃过夜,一抗和酶标二抗IgG—HRP;最佳稀释度为1∶200000和1∶5000。在此优化条件下制备的抗体检测黄曲霉毒素B1具有很高的特异性和灵敏性,具有实际应用价值。     

西兰花中硫代葡萄糖苷的提取及抑菌试验初报

采用甲醇法提取西兰花中硫代葡萄糖苷,利用重量法测定其中硫代葡萄糖苷的含量,得出硫代葡萄糖苷最佳提取条件,并对硫代葡萄糖苷提取液进行酸水解,通过抑菌圈实验,分析了西兰花中硫代葡萄糖苷水解产物异硫氰酸酯类的抑菌性。其结果表明,采用80％甲醇溶液、料液比为10：40（w／v）、80℃为提取的最佳条件。西兰花花蕾中硫代葡萄糖苷的含量最高,达到39．90μmol／g;花茎中为18．28μmol／g：叶中为11．86μmol／g。实验结果表明异硫氰酸酯类对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、白葡萄球菌（White staphylococcus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）大肠杆菌（Escherichia coli）的抑菌作用均较明显。     

大豆油贮藏期间质量指标变化规律的研究

为掌握我国市售大豆食用油的贮存期间品质变化及结果安全性分析和评价,本研究采用实验室贮藏抽样检测的方法对某成品包装大豆油的生物的、物理的、化学的变化状态进行了分析。其结果表明,农药残留、重金属、溶剂残留和黄曲霉毒素B1在成品包装大豆油的整个贮藏阶段均未检测到,而过氧化值（POV）值和酸值（AV）值随贮藏时间显著上升,在试验期中过氧化值虽呈增加趋势,但低于国家标准,但贮存至4个月时,酸值达到0．21mgKOH．g^-4超出GB1535—2003标准要求（0．2mgKOH．g^-1）。苯并（a）芘（BaP）含量随贮藏时间缓慢减少。