运输应激对肉牛肝脏和脾脏中应激相关蛋白的影响

选取15头体况相似的健康肉牛作为研究对象,随机分为运输0h组、运输3h组和运输6h组,每组5头肉牛,采用公路运输方式运输(平均速度为80km/h)。采集各组牛肝脏和脾脏组织样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)2种试验方法检测各组肝脏和脾脏组织中应激蛋白-热休克蛋白70(HSP70)和急性期蛋白-C反应蛋白(CRP)含量的变化。qRT-PCR检测结果显示:与运输0h组相比,运输3h和6h肝脏组织中HSP70mRNA的表达量极显著升高(P0.01);而脾脏组织中HSP70mRNA只在运输应激6h后表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,运输应激后肝脏组织中CRP mRNA的表达量极显著升高(P0.01),脾脏组织中CRP mRNA的表达量显著升高(P0.05)。ELISA检测结果显示:与0h组相比,运输应激3h和6h肝脏中的HSP70质量浓度极显著升高(P0.01),脾脏中HSP70的质量浓度在运输6h后显著升高(P0.05);肝脏和脾脏CRP的表达在运输应激6h后极显著升高(P0.01)。结果表明:不同运输时间的运输应激可导致肝脏和脾脏中HSP70和CRP的浓度和mRNA转录水平升高,且肝脏中HSP70和CRP的表达量高于脾脏。HSP70和CRP可作为肉牛运输应激候选诊断标志物。     

肉牛肝脏miR-23a的靶基因及生物学功能预测

通过探究运输应激肉牛肝脏中miR-23a的表达变化,探究肉牛肝脏miR-23a与应激可能存在的关系,并对其进行生物学功能预测,深入探析miR-23a生物学功能。将10头肉牛随机分为运输0 h组、和运输6 h组,80 km/h的速度进行公路运输刺激。运用高通量测序技术筛选差异表达的肝脏miRNAs,采用生物信息学分析方法对miR-23a进行生物学功能预测。结果表明,与运输0 h组相比,运输应激两组肝脏miR-23a表达量升高。应用Targetscan、miRWalk和miRTarBase三款软件对miR-23a靶基因预测,分别预测到1238、10112、427个靶基因。其中,发现HSPA13、MAP3K5、AKT3、IL6R等可能是与应激联系密切的靶基因。结果提示,运输应激肉牛肝脏miR-23a的表达变化能够对细胞生长发育、增殖、分化、和凋亡等方面产生重要影响。     

产前冷应激对妊娠母鼠肝脏HSP70和P65的影响

将20只SPF级妊娠Wister母鼠随机分为常温对照组和冷应激组,每组10只。对照组妊娠母鼠妊娠期全程在(22±2)℃的环境中饲养,冷应激组母鼠在产前7d置于(4±0.1)℃人工智能气候室中饲养,分别冷刺激3d和7d。麻醉后采集各时间点(每个时间点5只妊娠母鼠)肝脏组织样本,常温对照组在相同时间点采集肝脏组织样本。采用Westen blot方法检测肝脏中HSP70、P65蛋白的表达量。结果显示:冷应激组妊娠母鼠肝脏中HSP70和P65蛋白表达量均高于常温对照组,且差异均有统计学意义(P0.05)。结果表明:产前冷应激使妊娠母鼠肝脏中HSP70、P65蛋白表达量升高,推测这有可能促使肝脏中炎症反应的发生。     

产前冷应激对妊娠母鼠肝脏炎症及细胞凋亡的影响

为探讨产前冷应激对妊娠期大鼠肝脏的影响。本研究选择20只体质量(230±20)g的健康SPF级雌性Wistar大鼠,预饲1周,合笼交配。受孕后随即分为常温对照组(RT)和冷应激组(C)2组,每组10只。RT组全程处于(22±2)℃、相对湿度(40.0±0.1)%的环境中饲养,C组在妊娠第15天转移到(4.0±0.1)℃,相对湿度(40.0±0.1)%环境中进行冷刺激。在妊娠第17,21天,各组随机选取5只进行麻醉处死,采集肝脏组织,用Western blot的方法检测肝脏中IL-1β、Bcl-xL和Bax的蛋白表达量。结果显示,在妊娠第17天(冷刺激3d),C组大鼠肝脏中IL-1β的表达量显著高于RT组(P0.05);肝脏中Bcl-xL/Bax比值显著降低(P0.05)。结果表明冷应激可能会导致妊娠期大鼠肝脏发生炎症反应,并促进细胞凋亡,对肝脏产生一定损伤。     

产前应激与胎儿发育

产前应激(prenatal stress,PS)是妊娠期母体受到各种内外界环境因素、社会和心理因素刺激时,所表现出的全身性、特异性适应反应。产前应激不仅影响母体本身,还可能影响胎儿的正常发育,甚至诱发终身疾病。发育中的胎儿对外界刺激具有较高的敏感性和较低的适应性,且产前应激对胎儿的生理和心理上都有较大的危害,致使后代生长发育迟缓、免疫功能紊乱、疾病易感性增加,而产前应激对胎儿的影响取决于应激的类型、时间、强度以及后代的性别,因此本研究主要综述光照应激、束缚应激、冷应激等几种产前应激对胎儿发育的影响,为研究动物产前应激提供理论基础。     

应激相关诊断标志物的研究进展

动物体在其生长发育过程中,在应激源的刺激下,会发生各种应激反应,从而影响畜禽生产性能,严重的还会导致动物死亡,给畜禽产业造成了巨大的经济损失,同时限制其快速发展。而衡量动物应激状态的重要指标就是寻找动物应激诊断标志物,这对动物应激的早期监测具有重要意义。现主要针对应激状态下应激相关诊断标志物,结合相关蛋白质、激素及miRNA等进行综述。     

亚低温对大鼠肝细胞能量代谢中关键酶LDH、SDH和MDH活性以及PA含量的影响

为了探讨亚低温对大鼠肝细胞能量代谢的影响,试验将大鼠肝细胞系分成3组,分别进行32℃冷刺激0 h、4 h、8 h,应用ELISA法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)活性和丙酮酸(PA)含量。结果表明:32℃冷刺激时,0小时、4小时和8小时的琥珀酸脱氢酶活性没有统计学差异,8 h组乳酸脱氢酶活性显著高于0 h组和4 h组(P0.05),4 h组和8 h组丙酮酸含量和苹果酸脱氢酶活性显著低于0 h组(P0.05)。说明对大鼠肝细胞进行亚低温刺激会导致大鼠肝细胞的糖酵解反应加快,而糖有氧氧化被抑制。     

急性冷应激大鼠肝脏中novel-miR-133-5p生物学功能预测

本研究旨在检测6种novel microRNA(novel-miR-1-5p,novel-miR-6-3p,novel-miR-9-3p,novel-miR-25-5p,novel-miR-133-5p和novel-miR-287-3p)在急性冷刺激大鼠肝脏中的表达情况,并对novel-miR-133-5p的生物学功能进行分析,预测了novel-miR-133-5p在冷应激大鼠肝脏内的功能。前期冷应激大鼠血清高通量测序试验的结果中发现这6种差异表达的novel microRNA。本试验采用了30只12周龄SPF级Wistar雄性大鼠,体质量(350±10)g,将大鼠放置人工气候室预饲7d,预饲温度为(24.0±0.1)℃。随机分成急性冷应激组(CSS)和常温对照组(NTS),对CSS急性冷刺激12h后,冷刺激温度为(4.0±0.1)℃。采取肝脏提取总RNA,应用qRT-PCR方法检测6种novel microRNA在急性冷刺激大鼠肝脏的表达情况。结果显示,6种novel microRNA在急性冷刺激大鼠肝脏均有表达,除novel-miR-9-3p外,其余的都显著升高,novel-miR-133-5p升高的最为明显(P0.01)。对novel-miR-133-5p进行生物学信息分析发现,novel-miR-133-5p的靶基因有2 048个,其中bcl9与wnt11肿瘤的发生、增殖和迁移有关;同时wnt11也对正常细胞的增殖、分化和凋亡也有重要影响;Smarcal1是一种DNA结合蛋白,可以修复因损伤而停止复制的DNA。结果表明,在大鼠血清中存在的6种novel microRNA同样存在于冷应激大鼠肝脏中,在冷应激状态下novel-miR-133-5p的异常上调可能会对机体的生长发育、免疫调节和遗传等方面有重要的影响。     

不同运输时间运输应激对肉牛组织中急性期蛋白的影响

为研究不同时间运输应激对肉牛肝脏和脾脏中急性期蛋白的影响,选取15头体质量相近健康肉牛作为实验动物,并将其随机分为运输0h组、运输应激3h组和运输应激6h组,每组5头肉牛。以速度为80km/h公路运输。运输刺激后,立即采集试验肉牛肝脏和脾脏。采用酶联免疫吸附试验和荧光定量PCR方法分别测定肝脏和脾脏中急性期蛋白SAA和HP的水平。结果表明:qRT-PCR方法检测结果显示,与运输0h组相比,运输3,6h后,肝脏组织中SAA的mRNA的表达量均显著升高(P0.05);而脾脏组织中SAA只在运输应激6h后,表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,在运输应激3h后,肝脏组织中HP的mRNA显著升高。在运输应激6h后,脾脏组织中HP的mRNA的表达量呈极显著性水平升高(P0.01)。使用ELISA方法检测结果显示,与0h组相比,运输应激后,肝脏组织中SAA浓度呈递增显著性水平升高(P0.05)。与运输0h组相比,运输应激6h后,肝脏和脾脏组织中SAA、HP均极显著性升高(P0.01)。说明不同运输时间可以引起不同组织中SAA和HP的变化,机体可以通过改变肝脏和脾脏中SAA和HP的含量来应对应激反应。