H9N2 AIV灭活疫苗免疫SPF鸡攻毒后肺组织免疫相关基因表达变化研究

[目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡,随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗,3周后以10⁶ EID₅₀的病毒量进行攻毒,采集拭子、血清、气管、肺组织等样品,通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量;并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示,SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示,SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后...     

肠道微生物对流感病毒感染小鼠肺损伤调节作用的研究

流感病毒作为一种常见的呼吸道病毒,是人类健康和世界经济的巨大威胁。目前流感治疗遇到病毒高度突变的问题,不断完善已有的控制流感感染方法的同时,也需要开阔视野从宿主反应的角度探索控制流感的新措施,本研究从肠道微生物的角度探索流感造成肺损伤的机制。提前3周将组合抗生素和益生元添加到小鼠饮水中构建不同的肠道微生物环境,小鼠感染流感病毒后运用16S rDNA技术测定结肠微生物组成,蛋白免疫印迹法测定肺部Th17和Treg细胞转录因子RORγT和Foxp3的表达情况,苏木精-伊红染色、荧光定量PCR测定肺损伤状况。结果表明,提前使用组合抗生素和益生元能够改变肠道菌群组成,通过降低肠道菌群数目和增加肠道拟杆菌相对丰度保护肠道,从而反作用于肺部诱导肺Treg细胞分化,抑制Th17细胞分化,改善流感造成的肺损伤。     

自噬在H9N2亚型禽流感病毒和大肠杆菌共感染中的作用研究

为探究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)和大肠杆菌共感染对无特定病原体(SPF)鸡肺组织和免疫系统的损伤及细胞自噬在共感染致病过程中的作用，选用60只3周龄SPF鸡，随机平均分为对照组、单独细菌感染组、单独病毒感染组、先病毒后细菌共感染组和先细菌后病毒共感染组5组。于处理后第1、3、5和7天各组随机选择3只鸡采集血清和肺组织，利用荧光定量PCR和HE组织学染色技术探究共感染对SPF鸡的肺组织系数、肺组织病理变化和肺组织屏障功能的影响。利用细胞培养、荧光定量PCR、酶联免疫吸附和Western blot等技术探究共感染与细胞自噬的关系以及自噬对共感染炎症反应和辅助性T细胞17(Th17)免疫反应的影响。结果显示：先病毒后细菌共感染试验组导致鸡肺组织病理损伤严重；共感染诱导强烈的细胞自噬，先病毒后细菌组自噬相关因子(LC3、Beclin-1)的蛋白表达水平与其他组相比极显著升高(P<0.01);同时与其他组相比，先病毒后细菌组炎症因子基因表达水平极显著升高(P<0.01),Th17免疫相关因子基因表达水平极显著降低(P<0.01)。提示：自噬通过促进共感染中炎性因子释放且抑...