抽提物处理供体细胞对克隆胚胎发育的影响

本研究采用爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞(JBCFF),并以发生重编程的细胞为核供体进行体细胞核移植,研究其对克隆效率的影响.分别超排3只爪蟾,收集卵母细胞后提取其抽提物,用BCA蛋白浓度测定试剂盒确定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其中所含蛋白的种类.应用细胞膜透化剂Digitonin对建立的JBCFF进行通透处理和PI染色,筛选最适浓度;并用获得的抽提物处理牛体细胞,获得重编程细胞.以发生重编程的体细胞为供体进行核移植,同时比较离子霉素+6-DMAP和A23187+6-DMAP两种组合激活后克隆胚的体外发育能力.结果,3个爪蟾卵母细胞抽提物样品的蛋白浓度分别为56.2255、64.6570和71.2158 μg/mL,其中所含蛋白种类一致,主要集中在40~55、70~100 ku之间.经过连续的筛选,透化剂Digitonin对JBCFF通透处理的最适浓度为7 μg/mL,PI染色显示透化效率为55.44%.爪蟾卵母细胞抽提物与体细胞共孵育后继续培养6~7 d,细胞聚集形成"克隆簇".分别以"克隆簇"细胞和未处理细胞为核供体,制备的重构胚在融合率(92.83%和96.04%)、卵裂率(89.64%和89.78%)和囊胚率(24.06%和23.12%)均无显著差异(P>0.05);离子霉素+6-DMAP和A23187+6-DMAP两种激活方式对克隆胚胎的分裂率(92.16%和92.28%)和囊胚率(23.21%和24.18%)均无显著影响(P>0.05).爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛体细胞发生重编程,并恢复到较低的分化状态,但没有显著促进克隆胚胎的体外发育,可见缺少对胚胎发育起重要作用的重编程过程,还需要继续深入研究.     

银狐α-卫星DNA的克隆及序列分析

利用限制性内切酶Sac I酶切银狐基因组,经琼脂糖凝胶电泳,对特异性亮带进行克隆、测序及序列分析.结果获得9个银狐α-卫星DNA序列,该卫星DNA单体大小为737bp,G+C平均为52.7%,单体之间同源性为90%～97%,每个单体由3个约245bp的亚重复串联构成,亚重复之间的同源性为51%～57%.银狐与犬α-卫星DNA的同源性约为77%,而与蓝狐α-卫星DNA的同源性大于90%.α-卫星DNA在蓝狐基因组内的含量显著高于银狐.由于银狐(2n=34+Bs)与蓝狐(2n=50)染色体数目存在较大差异,因此推测α-卫星DNA可能参与了染色体易位,是染色体断裂与融合的靶序列.     

北京地区畜禽遗传资源保护与利用浅析

依据《中华人民共和国畜牧法》对畜禽遗传资源保护和利用的有关规定,结合《国家畜禽遗传资源品种名录（2021版）》颁布,笔者深入国家级和市级畜禽遗传资源保种场、核心育种场、家禽良种扩繁基地开展调研。本文阐述了北京地区畜禽遗传资源现状,研究分析不利于资源保护与利用的症结和监督执法的薄弱环节,旨在促进种质资源保护与开发,推动育种技术攻关,壮大优势畜禽种业企业,为进一步推进北京地区畜牧业特别是种业健康依法有序发展做出有益探索。     

转乳铁蛋白肽和α干扰素基因的牛胎儿成纤维细胞的制备

旨在构建含有乳铁蛋白肽基因和a干扰素基因的载体,并制备转基因牛胎儿成纤维细胞,为研制抗乳房炎和口蹄疫转基因克隆牛提供供体细胞.本研究构建了由山羊β-酪蛋白启动子启动的牛乳铁蛋白肽基因和由CMV启动子调控的人α干扰素基因的载体,以EGFP基因作为报告基因,neo基因作为筛选基因;分别采用脂质体和电击法转染牛胎儿成纤维细胞,G418筛选得到转基因阳性细胞,并用PCR方法检测转基因细胞中目的基因的整合情况,用Western blotting检测α干扰素蛋白的表达.结果,得到了同时含有牛乳铁蛋白肽基因和人α干扰素基因的转基因牛胎儿成纤维细胞,并且α干扰素蛋白在转基因细胞中能有效表达.     

貉α-卫星DNA的克隆及序列分析

根据蓝狐、银狐及犬口_卫星DNA序列设计引物RSP1和RSP2在貉基因组中经PCR扩增获得5条分子质量大小不同的DNA片段,分别命名为RSP1～RSP5,经克隆及测序获得14个RSP序列;序列分析表明,除RSP4外,同类RSP片段的不同序列的长度差异很小且同源性大于90%,不同种类的RSP片段的长度差异很大,最大为1 815 bp,最小为495 bp,但所有序列的3'端约500 bp序列都具有高度的同源性,大于90%;经Blast检索,所克隆的RSP序列的部分区域与蓝狐、银狐及犬α-卫星DNA序列具有约75%的同源性,证明所克隆的RSP序列为貉α-卫星DNA序列,但其单体大小及亚重复的组成还需进一步研究.