大鼠清醒状态下单人尾静脉注射方法研究

为了介绍大鼠清醒状态下单人尾静脉注射方法及操作技巧,并观察在该种方法指导下尾静脉注射的成功率。选择:健康雄性SD大鼠10只,采用经验方法在大鼠清醒状态下进行单人尾静脉注射,观察第1针成功只数(率)、穿刺成功只数(率)及完成时间。结果显示,第1针成功9只,成功率90%;穿刺成功10只,总成功率100%;固定及注射时间平均89 s。表明借助大鼠固定器进行单人操作,简单易学,成功率高,可重复,省时省力。     

稻瘟病抗性基因Pita~2候选基因多位点编辑载体的构建

Pita2是定位于水稻第12号染色体着丝粒区域的稻瘟病广谱抗性基因,前期研究中通过精细定位得到了5个候选基因,其功能及作用原理还不清楚。本研究利用CRISPR/Cas9系统构建Pita2候选基因的多位点编辑载体。首先在候选基因外显子区域找到2个含有PAM序列的特异性靶位点序列,并构建候选基因入门载体SK-gRNA,然后利用同尾酶将SK-gRNA重组载体上的目的片段gRNA酶切,采用一步法将2个gRNA连接到双元表达载体p C1300-Cas9。质粒PCR鉴定以及测序的结果表明,以上5个多位点编辑载体构建成功。后期通过遗传转化并鉴定候选基因表达量与抗病性之间的关系,为水稻稻瘟病抗性基因Pita2功能研究奠定基础。