山东省青岛市2015年禽流感监测分析

[目的]调查青岛市家禽高致病性禽流感免疫水平,测定该地区的禽流感流行率,分析流行的风险因素。[方法]在全市家禽养殖场（户）、农贸市场、屠宰场和野鸟栖息地随机抽样,采用血凝抑制方法测抗体,采用荧光定量RT-PCR方法检测禽流感病原,同时开展禽流感血清学和病原学检测。利用GIS、EXCEL软件,分析青岛市禽流感检测样品的空间分布、免疫抗体水平、病原流行率及分布。[结果]青岛市家禽H5N1禽流感（Re-6）免疫抗体场户合格率为76.3%,个体合格率为74.8%;H5N1禽流感（Re-7）免疫抗体场户合格率为72.5%,个体合格率为71.4%;H5亚型禽流感病原学检测全部阴性;H9亚型禽流感个体流行率为1.18%,全部来源于农贸市场和屠宰场。[结论]青岛市家禽高致病性禽流感的免疫状况良好,在所有家禽和野禽活动场点未发现高致病性禽流感病毒,表明青岛市高致病性禽流感防控效果较好。     

山东省青岛市非洲猪瘟传入风险评估

为准确分析当前形势下非洲猪瘟(ASF)传入山东省青岛市的可能性,参照世界动物卫生组织(OIE)风险分析方法,分析生猪及其产品调运、运输车辆和人员消毒、生猪养殖、相关场所生物安全、ASF实验室检测、病死猪无害化处理和餐厨垃圾处理等数据信息,评估ASF传入风险、暴露风险和发生后果。结果显示:ASF传入青岛市的风险较高,主要传入风险是大量生猪及其产品的调运;主要暴露风险是运输屠宰生猪及其产品的车辆、屠宰厂及肉制品加工企业冷库储备的猪肉及其产品;ASF传入后,会对青岛市的生猪养殖业、猪肉制品贸易和城市形象形成很大影响。因此,山东省青岛市应针对ASF传入和传播的高风险点,采取相应防控措施,严防ASF传入和传播,以保障青岛市养猪业的健康发展和猪肉食品供给。本研究为各地非洲猪瘟防控提供了技术参考。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

从青岛某养猪场送检的猪关节液中分离致病细菌,经分离培养、生化鉴定、PCR扩增、产物序列分析等,确定该菌株为副猪嗜血杆菌。采用全自动微生物生长分析系统测定HPS生长情况,试验数据反应出HPS连续培养中,4 h后进入对数生长期,14 h进入平台生长期,此时菌体数目较大,为HPS灭活疫苗的研制中灭活时间的选取提供了依据。     

山东省青岛市推进畜禽强制免疫“先打后补”政策的有关思考

2017年起,青岛市根据国家重大动物疫病强制免疫政策规定,落实畜禽养殖经营者强制免疫主体责任,全面开展重大动物疫病强制免疫疫苗经费直接补贴试点工作。三年多来,试点工作推进顺利,相关制度初步建立,强制免疫补助政策实施机制逐步完善。但是在政策实施过程中,仍存在着宣传引导力度不够、养殖场户主动性意识不强等问题,由此提出发挥政府引导作用、扩大政策宣贯覆盖面、优化申报流程、完善疫苗供应链条体系建设、强化免疫效果监测评价等思考,以期为全面推进畜禽强制免疫"先打后补"工作提供参考。     

羊痘病毒活载体疫苗研究进展

广义的"羊痘"包括山羊痘、绵羊痘和结节皮肤病,是羊、牛等反刍动物的重要皮肤传染病,三者分别由山羊痘病毒(Goatpox virus, GTPV)、绵羊痘病毒(Sheeppox virus, SPPV)和结节皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus, LSDV)感染引起,也可交叉感染。GTPV、SPPV和LSDV同属于痘病毒科(Poxviridae)羊痘病毒属(Capripoxvirus)成员,三者统称"羊痘病毒(capripoxvirus, CaPV)"。CaPVs基因组为两端共价闭合的线性双链DNA,对外源基因容纳性较强。病毒本身具有强启动子,可启动外源基因的转录进而对其进行蛋白表达。因此,CaPVs是理想的活疫苗载体,可在体内表达外源抗原并诱导特异性免疫反应。文章综述了CaPVs的基本特征、弱毒活疫苗及CaPV活载体疫苗的研究进展,以期为CaPV活载体疫苗的研究提供参考。     

稳定表达犬瘟热病毒Nectin4受体的Vero细胞系构建

为提高病毒的分离效率,本试验设计构建了能够表达犬瘟热病毒（canine distemper virus,CDV）上皮细胞Nectin4受体的Vero细胞。为增加蛋白定位的准确性并易于鉴定,使用Igκ信号肽替换原有信号肽序列并添加了HA标签,在Nectin4 ORF后串联IRES-Puro序列并连入pCI-Neo真核表达载体,得到完整的转染载体pCI-N4。不同浓度嘌呤霉素孵育Vero细胞得到最小筛选浓度为6 μg/mL。pCI-N4重组质粒转染Vero细胞后使用6 μg/mL嘌呤霉素筛选,5~7 d后出现具有抗性的细胞簇,有限稀释法连续单克隆纯化3代后获得稳定表达的细胞系。构建细胞系传代至15代能检测到Nectin4 mRNA转录,Western blotting检测筛选细胞得到约60 ku目的蛋白表达,间接免疫荧光检测显示纯化细胞蛋白表达丰度高且表达均一,激光共聚焦观察Nectin4目的蛋白定位于细胞膜,说明筛选的Vero-Nectin4细胞系能够稳定表达,表达蛋白能够满足作为CDV受体的结构要求。临床CDV阳性病料经研磨滤菌处理后接种构建细胞系能够产生典型的合胞体细胞病变,Vero对照组盲传3次未有病变。分离毒株TICD₅₀=10^-5.9/0.1 mL。构建的Vero-Nectin4细胞系可用于CDV分离。     

洛阳地区犬细小病毒病的流行病学调查

为了解近年来洛阳地区犬细小病毒(CPV)的感染情况,于2011年12月-2013年11月对该地区部分宠物医院的病犬进行流行病学调查.结果显示,该地区宠物犬中CPV阳性率为4.77％,其中秋季和冬季CPV感染率较高,分别为5.51％和7.21％;CPV在不同年龄犬中的检出率介于0.09％～14.23％,其中4月龄以内犬的发病率均高于10％,随着年龄的增长其发病率逐渐降低;未经过犬细小病毒弱毒疫苗系统免疫的犬占59.28％,而经过免疫的犬仅占3.62％;对CPV其中10个VP2片段部分序列进行测定和分析发现,其核苷酸同源性介于96.3％～100％,在进化谱中属于同一分支,与10个不同国家和地区的参考毒株核苷酸序列相比,亲缘关系最近的是来自泰国的KU146_09株和台湾的CPV-87株,最远的是来自四川的CPV-SC-JM株、法国的04S6株、厄瓜多尔的2c_ME1_ECU2012株.     

动物疫病区域化管理在狂犬病防控中的应用初探

为全面推进狂犬病防控工作,青岛市多措并举,完善基础体系,精准施策,宣传造势,形成了一套狂犬病城乡同步免疫的“青岛经验”在全国范围内推广。为将习近平总书记“人病兽防、关口前移”的理念落实落地,青岛市在已有工作基础上,积极探索将动物疫病区域化管理应用在狂犬病防控中,然而,笔者发现,狂犬病因其具有潜伏期长、易感动物行踪不定等特点,在确定免疫无狂犬病区的范围和建立屏障体系等方面具有一定难度,下一步将持续深入探索,争取完成“到2030年消除犬作为传播媒介的狂犬病”的目标。     

山东省某鸭场大肠杆菌病病原的分离鉴定与耐药性分析

致病性大肠杆菌耐药程度日益严重,已对畜牧业生产安全和公共卫生安全构成了较大威胁。2020年山东省某鸭场发生疑似禽大肠杆菌病,大批雏鸭死亡。为精准诊断和了解病原耐药情况,对病死鸭心脏组织病料进行细菌分离,并对分离菌进行16S rDNA鉴定、抗菌药物敏感性测定和β-内酰胺类耐药基因bla_CTX-M检测。结果显示:从2只病死鸭心脏组织中分离出CD4-10、CD4-12等2株大肠杆菌;2株分离菌均对头孢噻肟、头孢噻呋、氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、恩诺沙星、链霉素、卡那霉素、强力霉素、萘啶酸和氟苯尼考高度耐药,对多黏菌素、美罗培南和磷霉素敏感,其中CD4-12菌株还对阿米卡星和庆大霉素表现敏感。2株菌均携带bla_CTX-M-1G耐药基因,未携带bla_CTX-M-9G耐药基因。结果表明,该鸭场大批雏鸭死亡是由多重耐药的大肠杆菌感染引起的,且分离菌耐药十分严重,因其携带bla_CTX-M-1G基因而对β-内酰胺类药物耐药。本研究为当地禽大肠杆菌病临床用药、疫苗制备及肉鸭科学养殖提供了信息支持。