叶酸对铅中毒幼年大鼠中枢神经系统的保护作用

通过研究铅对大鼠中枢神经元的损伤以及应用叶酸后的影响，探讨了叶酸对铅中毒条件下中枢神经元的保护作用。将健康清洁级初断乳3周龄SD大鼠随机分为铅染毒组，叶酸给药组及生理盐水组。各组于处理后第2、3、4周取材。铅染毒组、叶酸给药组每组各30只，生理盐水组12只，共72只。测量血铅，分别进行海马和小脑组织的H—E染色及凋亡抑制基因Bcl—2、凋亡基因Bax的蛋白免疫电泳，并作光密度分析。结果，通过对各个时间段各组血铅测定，可得叶酸给药组血铅含量低于铅染毒组。铅染毒组Bcl-2蛋白表达量少于给药组，而Bax多于给药组，H—E染色结果铅染毒组神经细胞数量明显少于叶酸给药组。结果表明，叶酸可降低铅中毒大鼠的血铅浓度，并具有一定抗细胞损伤作用，对铅中毒大鼠的中枢神经元具有一定的保护作用。     

猫多能性基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

从含有猫Oct4、Sox2、Klf4及c-Myc的质粒中获取目的基因,将目的基因与携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体LV5进行定向连接,构建慢病毒表达载体LV-Oct4、LV-Sox2、LV-Klf4、LV-c-Myc,将其连接产物分别转化至细菌感受态细胞中,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后测序,通过lipofectamine2000介导转染293T细胞对慢病毒进行包装并测定病毒滴度,探讨猫多能性基因Oct4、Sox2、Klf4及c-Myc慢病毒载体的构建与包装。结果表明:经双酶切鉴定及测序分析,成功构建并包装出LV-Oct4、LV-Sox2、LV-Klf4及LV-c-Myc慢病毒载体,基因测序结果与目标序列完全一致,且病毒滴度均达到107 TU·mL-1以上。说明成功地构建了猫多能性基因慢病毒表达载体,获得稳定产生慢病毒颗粒的包装细胞株。     

表达鼠源GLP-2重组嗜酸乳杆菌的构建

嗜酸乳杆菌是一种常见的肠道益生菌。嗜酸乳杆菌及其代谢产物可以调节肠道菌群的比例,增强肠道屏障功能,调节相关免疫反应,从而维护肠道内环境稳态,在一定程度上达到了治疗IBD的作用。胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)作为一种肠道营养因子,可促进肠粘膜增殖、抑制其凋亡,从而改善肠屏障功能,促进肠吸收功能恢复。本研究将GLP-2与嗜酸乳杆菌信号肽重组连接pMG36e质粒上,通过电转化转入感受态嗜酸乳杆菌中,构成重组嗜酸乳杆菌。结果表明,重组pMG36e质粒中扩增GLP-2基因与基因库公布的一致,通过Western blot检测到重组嗜酸乳杆菌上清液中有GLP-2蛋白表达。重组嗜酸乳杆菌的成功构建,使GLP-2与嗜酸乳杆菌对IBD发挥了双重疗效,为后续研究重组益生菌应用于临床治疗IBD奠定了基础。