细胞松弛素B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响

目的　探讨细胞松弛素 B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响。方法　常规超排 KM小鼠获卵母细胞 ,将有明显第一极体的卵母细胞放入含有 5× 10 - 3、1× 10 - 2 、2× 10 - 2 g/ L CB的成熟培养液中孵育 15 min,采用盲吸法去核 ,去核后的卵母细胞放入含 5× 10 - 3g/ L Hoechst33342的成熟培养液中染色 15 min,在荧光显微镜下检查去核的效率。结果　 CB组去核率可达 88.2 % ,而对照组去核成功率仅达 2 9.7% ,两者的去核效果统计学上有显著差异 ;同时 CB的浓度过高会影响去核的效果 ,使卵母细胞的破溃率升高。结论　 CB有利于去核 ,同时卵胞膜可以借助磷脂双层的游动性而很快得到修复 ;高浓度的 CB对卵胞膜作用过于强烈 ,细胞骨架严重破坏 ,磷脂双层结构的弹性和粘性减弱 ,修复能力降低 ,影响胚胎的构建。     

猕猴核移植研究进展及前景(续完)

3.5 卵母细胞、胚胎和体细胞的冻存超低温冷冻是体外保存体细胞、卵母细胞和胚胎的主要方法.体细胞冻存技术相对简单且复苏后具有较高的存活率,已有用体细胞冻存复苏后进行核移植产生存活哺乳动物的先例[24],猕猴核移植研究时,将经过短期传代的正常二倍体体细胞进行冻存,是解决供体细胞来源的可行方法之一.     

用于心脏电生理研究的动物模型

简单介绍了用于心脏电生理研究的动物模型，包括整体模型和单细胞模型。整体模型已从传统的麻醉状态转为清醒状态模型、心肌单细胞模型与分子生物学和克隆技术相结合在心肌电生理及其他学科研究中具有广泛应用前景。     

大鼠成纤维细胞同步处理的流式细胞仪分析

目的 :研究 SD大鼠成纤维细胞同步处理后的各细胞周期的变化 ,探讨供体细胞的细胞周期对核移植胚胎发育的影响。方法 :分离培养 SD大鼠皮肤成纤维细胞 ,传 3～ 5代 ,分别经血清饥饿 2～ 6d和 1 0 mg/ ml nocodazole处理 2 4 h,流式细胞仪分析处理组和对照组的细胞周期百分比。结果 :血清饥饿、nocodazole处理及对照组的 G0 + G1期成纤维细胞的百分比 ( % )分别为 74.5± 4.4、49.5± 4.65和 5 0 .1 2± 3.9;G2 / M期细胞的百分比 ( % )分别为 :1 9.2 5± 4.2、2 5 .98± 2 .7及 45 .9± 5 .2 1。结论 :血清饥饿能较好地使大鼠成纤维细胞同步于 G0 和 G1期 ;nocodazole处理则使细胞较大程度同步于 G2 和 M期。     

流式细胞仪分析法检测黑熊成纤维细胞周期同步化处理效果

分离培养黑熊皮肤成纤维细胞 ,传 3代 ,分别经血清饥饿 2～ 6 d和 10 g/ L Nocodazole处理 2 4 h后 ,用流式细胞仪分析 2个处理组和对照组细胞的周期相 ,以研究黑熊成纤维细胞同步化处理后的细胞周期时相的变化 ,探讨核移植供体细胞的细胞周期对核移植胚胎发育的影响。结果显示 ,血清饥饿组、Nocodazole处理组及对照组的 G0 +G1 期成纤维细胞的百分率分别为 (85 .0 5± 7.0 0 ) % ,(4 5 .9± 3.7) %和 (5 9.3± 6 .7) % ;G2 / M期细胞的百分率分别为 (10 .4± 6 .8) % ,(4 6 .3± 4 .2 ) %及 (2 3.0 5± 1.0 5 ) %。表明血清饥饿法能较好地使黑熊成纤维细胞同步于 G0 和 G1 期 ;Nocodazole处理可以使细胞较大程度同步于 G2 和 M期。     

重复超数排卵获取家兔成熟卵母细胞的研究

采用重复手术方法 ,对经过激素刺激超数排卵的家兔成熟卵母细胞进行收集和筛选评价 ,探索不同组合激素处理对家兔进行超数排卵 ,获得大量的高质量卵母细胞简单有效的方法 ,为进行兔转基因、核移植等相关方面的研究奠定基础。采用FSH +HCG和FSH混合PVP(2 5 % )两种激素处理组合 ,并用正常排卵雌兔作对照 ,经过三次手术法取卵 (每次间隔至少 5 0d以上 )。经输卵管插管 ,由输卵管伞端收集卵母细胞并进行筛选。结果 ,采用激素处理的两组获取总卵母细胞数和可用卵数比对照组均高出 3倍以上 (P <0 0 5 ) ,两种超排方法之间超排效果无显著差异 (P >0 1) ;三次连续手术均成活的家兔中 ,对照组和FSH +HCG组三次取卵效果无显著差异 (P >0 0 5 ) ,FSH混合PVP(2 5 % )组首次手术与第三次手术出现显著差异 (P <0 0 1)。重复采用FSH +HCG和FSH混合PVP(2 5 % )两种激素处理组合超数排卵 ,手术法收集卵母细胞 ,简化超排程序 ,增加超排效果 ,提高实验动物利用率     

猕猴核移植研究进展及前景

本文回顾了弥猴核移植相关简史，介绍了猕猴核移植的技术路线，对限制猕猴体细胞核移植研究的因素：核供体的筛选、卵母细胞的获得、超数排卵的影响因素、重构胚的激活及体外培养体系等进行了综述，并展望猕猴核移植的应用前景。     

透明质酸酶对牛卵母细胞孤雌激活的研究

在37－39℃50mL/L CO2条件下，用含80mL/L发情牛血清及50mL/L犊牛血清的M199成熟培养液培养牛的A、B级卵丘－卵母细胞复合体（COCs)，18－22h后以无血清的TCM199培养液洗涤3次，用透明质酸酶消化吹打脱去卵丘细胞，以无血清的M199培养液洗涤3次，移回成熟培养液中培养。结果：卵细胞于成熟后第3d开始出现卵裂，第5d卵裂率达到37％，第9d囊胚率达5％－9％。表明透明质酸酶可以促使成熟的牛孤雌卵母细胞激活并发育至囊胚。     

猕猴核移植研究进展及前景(待续)

本文回顾了猕猴核移植相关简史,介绍了猕猴核移植的技术路线,对限制猕猴体细胞核移植研究的因素:核供体的筛选、卵母细胞的获得、超数排卵的影响因素、重构胚的激活及体外培养体系等进行了综述,并展望猕猴核移植的应用前景.