连翘联合抗菌药物对多重耐药大肠杆菌B_3的抗菌试验

目的:测定连翘水煎剂及其与抗菌药物联合对多重耐药大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B_3菌株的抑菌效果。方法:采用牛津杯法测定连翘对B_3菌的抑菌作用,利用微量肉汤稀释法测定连翘、四环素和磺胺间甲氧嘧啶钠对B_3菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);通过棋盘稀释法来测定连翘和上述抗菌药物的联合抑菌效果。结果:连翘能抑制多重耐药大肠杆菌B_3菌株的生长繁殖,呈现抗菌作用;试验药物对B_3菌株的最小抑菌浓度分别为连翘125.0mg/mL、四环素12.8 mg/mL、磺胺间甲氧嘧啶钠50.0 mg/mL;部分抑菌浓度(fractional inhibitory concentration,FIC)指数结果显示连翘与四环素联合呈相加作用,连翘与磺胺间甲氧嘧啶钠联合呈无关作用。本试验为兽医临床解决细菌耐药问题提供了用药新思路,同时为开发中草药制剂提供依据。     

猪CD127流式单克隆抗体的研制

[目的]研制出猪CD127(调节因子IL-7受体α链)流式单克隆抗体,为研究分析猪淋巴细胞亚群,尤其是猪Treg细胞亚群提供流式细胞分析抗体,也为进一步探究猪抗病性状与免疫机制间的关系打下基础.[方法]克隆猪CD127基因片段,通过原核载体诱导表达出相应的融合蛋白,以纯化后的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,然后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,综合ELISA和流式细胞仪检测筛选出亚克隆抗体,并采用Western blotting验证所得亚克隆抗体能否与猪淋巴细胞上的CD127特异性结合.[结果]猪CD127基因cDNA全长1999 bp,第49~1428 bp为开放阅读框(ORF),编码459个氨基酸,其中前21位氨基酸为信号肽,成熟肽N端第1~219位氨基酸为胞外蛋白,第220~242位氨基酸为跨膜蛋白,第243~459位氨基酸为胞内蛋白.以pET28a和pET32a原核载体诱导表达CD127胞外片段可获得大小介于34~43 kD的融合蛋白,经Ni亲和层析柱纯化后用于免疫Balb/c小鼠,6只免疫小鼠血清中的多克隆抗体均能对猪淋巴细胞中的CD3阳性细胞(CD3+)进行共标记,其中以M2和M4两只免疫小鼠抗血清对CD3+的共标记效果较优,分群清晰;但流式细胞仪检测发现,仅2.3%的CD3+能与M2混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,而67.0%的CD3+能与M4混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,且分群清晰.从M4混合池中筛选出6株效价稳定的亚克隆细胞株(1E2、1D8、2F3、2F8、3C6和4E1),且以1D8、2F3、2F8和3C6亚克隆抗体标记的CD3+较多,其培养基上清液中的分泌抗体在猪胸腺和肌肉样品中均能检测出大小约50 kD的单一目的条带.[结论]制备获得的猪CD127流式单克隆抗体可与T淋巴细胞表面的IL-7受体特异性结合,同时在流式细胞仪检测过程中可用于猪Treg细胞亚群检测.     

银翘汤对金黄色葡萄球菌的抗菌试验

本次试验通过利用金银花、连翘以及"银翘汤"在不同浓度条件下对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)体外抗菌作用的差异来探讨其配伍规律。以体外抗菌试验结果为考察指标,采用水煎法对金银花、连翘的有效成分进行提取,通过对金黄色葡萄球菌牛津杯抗菌试验比较不同浓度下的金银花、连翘、"银翘汤"的抗菌差异性。统计分析表明,不同浓度的金银花、连翘和"银翘汤"对金黄色葡萄球菌的抗菌效果差异极为显著;0.25g/ml的金银花对金黄色葡萄球菌抗菌效果最好,其次为1g/ml的连翘,"银翘汤"对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌效果,最佳浓度为0.5g/ml。本次试验结果为之后兽医临床用药奠定了一定的理论基础。