鸭MHCⅡβ基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备

据NCBI上已发表的序列设计引物,通过RT—PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到MHCⅡβ基因,将其克隆至pMD18-T载体上,经酶切分析及测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌BL21中诱导表达。蛋白纯化后,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,经1：100倍稀释后用于Westernblot分析。结果表明：克隆得到了鸭MHCⅡβ链基因,大小为798bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为92％;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度达95％。制备的鼠抗鸭MHCⅡβ多克隆抗体,经酶联免疫吸附实验（ELISA）与免疫印迹法（Westernblot）证实抗体的效价高、特异性强,为深入研究鸭MHCⅡ奠定了基础。     

肉鸭的饲养管理方法

伴随畜牧养殖产业的不断发展,肉鸭养殖逐渐向规模化、集约化、专业化方向发展,单位面积饲养数量正在日益增多,在提高了养殖人员的经济效益和养殖效率的同时,也对养殖人员科学饲养管理水平提出更高要求.本文分析了肉鸭养殖现状,提出了相应的养殖管理方法.     

鸭疫里默氏杆菌病的防治研究进展

正鸭疫里默氏杆菌病是一种接触性传染病,主要侵害以鸭为首的禽类动物,一旦患病致死率较高,且传染性强,为了使其得到有效控制必须重视对鸭疫里默氏杆菌病的防治。一、流行特点鸭疫里默氏杆菌病主要感染鸭子,不同鸭场的疫病流行情况也不同,该病的潜伏期为3～7 d,雏鸭最易感染病菌,2周龄的雏鸭易感易死亡,8周龄以上患病可能小。该疾病四季皆可感染,其中冬春季节交替时尤甚,病菌通过饲料、饮水、     

鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备

根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a.转化大肠杆菌BL21中诱导表达.电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体.结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础.     

鸭MHCⅡα融合蛋白表达条件的优化

构建了鸭MHCⅡα的融合表达载体PET-28a,对融合蛋白在大肠杆菌中表达量的影响因素进行了研究.SDS-PAGE分析表明,诱导温度22℃,时间3 h,IPTG浓度0.05 mmol/L,OD600m值0.45,通气量90%和pH 7.2时MHCⅡα融合蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的23.4%,比优化前提高了16.7%.蛋白经纯化后纯度可达90%.Western blot分析表明,该蛋白可被鼠抗鸭MHCⅡα阳性血清识别,具有较好的免疫学活性.