迟缓爱德华菌FliC-TolC融合蛋白表达及免疫特性研究

鞭毛蛋白FliC与外膜蛋白TolC均具有免疫保护效果,其中FliC蛋白具有疫苗佐剂的特性,但目前尚未有关迟缓爱德华菌(E.tarda)FliC-TolC融合产物免疫动物的免疫效果的相关报道。为研究E.tarda FliC-TolC融合蛋白的免疫特性,本研究利用融合PCR方法扩增获得fliC-tolC片段,构建重组载体pET-28a-fliC-tolC,并利用E.coli BL21表达系统表达了融合蛋白FliC-TolC。将纯化的FliC-TolC、TolC、FliC蛋白免疫小鼠后,以E.tarda强毒株攻毒评估免疫效果;并利用斑马鱼模型进行了平行试验。结果显示,本研究克隆了E.tarda fliC-tolC基因并表达和纯化了相应重组蛋白FliC-TolC;FliC-TolC蛋白激发小鼠产生的抗体水平优于FliC、TolC蛋白单独免疫组,表明FliC-TolC蛋白具有优良的免疫原性。攻毒试验表明FliC-TolC蛋白组小鼠对强毒株可产生较好的抵抗力,相对保护率为95%;斑马鱼攻毒试验相对保护率为60%。本研究证实了E.tarda重组蛋白FliC-TolC的免疫效力,为进一步研制E.tarda亚单位疫苗提供了参考和借鉴。     

牛多杀性巴氏杆菌LolA蛋白的免疫特性

为研究牛多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）外膜LolA蛋白的免疫特性，对牛Pm LolA蛋白进行原核表达和纯化，再通过动物模型对重组LolA蛋白（rLolA）的免疫特性进行评估。结果表明：本试验成功表达并纯化出rLolA蛋白，其相对分子质量大小约为40 ku；不同动物源性Pm的lolA基因同源性较高，说明该基因高度保守；rLolA蛋白能够引发机体体液免疫，分泌高表达量IgG抗体；rLolA蛋白的免疫原性对小鼠的免疫保护率达55%。本试验明确了牛Pm LolA蛋白的免疫特性，为Pm免疫保护蛋白筛选以及交叉保护性疫苗研发提供了参考。