抗真菌肽Drosomycin在原核生物表达系统中的可溶性表达

广谱性抗真菌肽Drosomycin的成熟肽由44个氨基酸组成,其中8个半胱氨酸形成4对二硫键,结构复杂.在原核表达该蛋白时容易形成包涵体,不利于实际利用.本研究希望通过与转铁蛋白TF融合表达的方式提高其可溶性表达.首先以果蝇DNA为模板扩增目的基因Drs,克隆至pCold TF载体,转化进大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导进行表达,利用SDS-PAGE及Western blot鉴定表达产物.结果表明重组表达质粒pCold TF-Drs构建成功,转化大肠杆菌后能正常表达,且目的产物为可溶性表达.这一结果为抗真菌肽Drosomycin实现生产上的利用奠定基础.     

家蚕BmPP基因的克隆及在Bm-12细胞的表达

MD-2(related lipid recognition protein,ML蛋白质)是哺乳动物中一类重要的脂类识别蛋白,可以识别革兰氏阴性杆菌细胞壁的主要组分脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS),二者形成复合体后被跨膜蛋白质受体TLR4(Toll like receptor 4)识别,进而启动下游免疫信号通路。在鳞翅目昆虫家蚕中,研究发现LPS可以诱导其体内抗菌肽的表达。为了研究家蚕中参与LPS识别的跨膜蛋白及信号通路,论文通过生物信息学分析家蚕基因组数据库中的MD-2类似基因,通过对其结构域分析,发现家蚕Bm PP具有与哺乳动物中的MD-2相似的保守结构域。同时抽提脂肪体RNA,通过RT-PCR获得Bm PP基因,将其克隆至p IEx-4载体上转染家蚕Bm12细胞,48 h后Western-blotting检测发现BmPP成功表达并分泌到细胞培养基中。研究结果将为进一步研究LPS诱导家蚕细胞发生免疫反应的通路研究提供材料。