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为研究火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis)胞质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)依赖性苹果酸酶(ME 1)的抗原性及其在火鸡组织滴虫中的定位，本研究根据本实验室前期对火鸡组织滴虫ME 1基因的测序结果设计引物，以虫体cDNA为模板，经RT-PCR扩增火鸡组织滴虫ME 1 (HmME 1)基因，结果显示Hm ME 1基因全长1 182 bp，将其克隆至p ET28a(+)构建重组表达载体后转化BL21 (DE3)，经IPTG诱导表达后，利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白r Hm ME 1，经SDS-PAGE和western blot鉴定，结果显示，r Hm ME 1以可溶形式存在，相对分子量约为46 ku，且纯化的r Hm ME 1条带单一，浓度为0.4 mg/mL。将该纯化的r Hm ME 1免疫小鼠，制备该重组蛋白的鼠抗血清(多克隆抗体)，采用间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价，结果显示制备的多克隆抗体效价为1∶409 600。采用western blot分别检测r Hm ME 1与制备的鼠源r Hm ME 1阳性血清和鸡源火鸡组织滴虫阳性血清的反应... 相似文献
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