单增李斯特菌Lm4b＿02324基因缺失株的构建及生物特性研究

【目的】研究Lm4b＿02324基因编码的6-磷酸-β-葡萄糖苷酶对单增李斯特菌生物学特性的影响,为研究单增李斯特菌的致病机制奠定基础。【方法】本研究使用重叠延伸PCR技术,并通过连续传代来构建稳定遗传野生型单增李斯特菌Lm928株的Lm4b＿02324基因缺失株(Lm928Δm4b＿02324)与Lm4b＿02324基因回补株(CLm928Δm4b＿02324)。通过检测不同培养时间的D_{600 nm}值并绘制生长曲线分析Lm928、Lm928ΔLm4b＿02324和CLm928ΔLm4b＿02324 3株菌的生长特性;对小鼠腹腔注射不同浓度的3株菌,观察感染后临床症状,统计死亡率,通过寇氏法计算3株菌对小鼠的半数致死量(LD₅₀);将Lm928、Lm928ΔLm4b＿02324和CLm928ΔLm4b＿02324以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为10分别感染HCMEC细胞,通过检测感染后不同时间细胞内的细菌数量分析各菌株的黏附与侵袭能力和胞内生存能力;提取野生株与缺失株DNA,使用prfA、mpl、h...